熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定，不但可以做一般的定量分析，而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化，從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍是200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。
熒光分光光度計(jì)的原理：
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。
物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)，這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光。
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同，其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí)，其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系，即IF=KC，利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析，與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。
熒光分光光度計(jì)與紫外分光光度計(jì)屬一類產(chǎn)品，結(jié)構(gòu)均由激發(fā)光源、單色器、樣品室、光電倍 增管和讀出（記錄）裝置所組成。但是它們光源是不同的，熒光分光光度計(jì)多采用高壓汞燈、氙燈和激光光源。同時(shí)，熒光測(cè)量多采用激發(fā)光和發(fā)射光成直角的光路，儀器組件的布置有所不同。
下圖為某型號(hào)熒光分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)圖，其主要工作原理是：當(dāng)光源光束經(jīng)入射單色器色散，提取所需波長(zhǎng)單色光照射于樣品上，由樣品發(fā)出的熒光經(jīng)發(fā) 射單色器色散后照射于光電倍增管，光電倍增管把熒光強(qiáng)度信號(hào)轉(zhuǎn)化成電信號(hào)并經(jīng)放器放大后記錄或讀出信號(hào)。
熒光分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)圖
1.氙燈（150W）；2.透鏡；3.光束分裂器；4.水平狹縫；5.激發(fā)單色器光柵；6.參考放電管；7.關(guān)閘；8.樣品室關(guān)閘；10.發(fā)射單色器光柵；12.光電倍增管
(1)激發(fā)光源：要比吸收法中光源強(qiáng)度大。
汞燈：發(fā)射強(qiáng)度大、穩(wěn)定，不需復(fù)雜電源，但譜線不連續(xù)，數(shù)目少，主要用于濾片熒光計(jì)。
碘鎢燈：提供連續(xù)光譜300~700mn。
氙燈：發(fā)出射線的強(qiáng)度大，譜線連續(xù)，分布于200~700 nm光域內(nèi)，且在300~400nm 波段內(nèi)射線強(qiáng)度幾乎相等，但該燈的電源功率要求大，且電源穩(wěn)定，因此電源結(jié)構(gòu)復(fù)雜。
激光：發(fā)光強(qiáng)度大，能極大地提高熒光分析的靈敏度。
(2)樣品池：通常由石英池（液體樣品用）或固體樣品架（粉末或片狀樣品）組成。測(cè)量液體時(shí)，光源與檢測(cè)器成直角安排；測(cè)量固體時(shí)，光源與檢測(cè)器成銳角安排。低溫?zé)晒鉁y(cè)定時(shí)在一樣品池外套一個(gè)液氮的透明石英真空瓶。
(3)單色器：熒光分光計(jì)通常具有兩個(gè)濾光片：第一濾光片在光源與樣品池之間，濾去不需要的光，讓需要的激發(fā)光通過。第二濾光片在樣品池與檢測(cè)器之間，濾去溶劑散射 光、容器表面散射光、雜質(zhì)發(fā)出的光等，讓待測(cè)物質(zhì)發(fā)射的熒光通過。
熒光分光光度計(jì)通常具有兩個(gè)光柵，位置同濾光片，單色性好。
(4)檢測(cè)器：因熒光通常較弱，采用光電倍增管作檢測(cè)器，靈敏度高。選擇光電倍增管要考慮：響應(yīng)波長(zhǎng)、靈敏度和嗓聲水平。 藍(lán)敏管對(duì)蛋白質(zhì)、核酸的測(cè)量適用，而紅敏管則適用于熒光染料檢測(cè)。
(5)顯示系統(tǒng)：光度表、計(jì)算機(jī)操作系統(tǒng)等。
補(bǔ)充說明：與紫外分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)區(qū)別：
1.熒光分光光度計(jì)采用的是垂直的測(cè)量方式，以消除透射光的影響。
2.檢測(cè)器前面有無單色器，熒光分光光度計(jì)有兩個(gè)單色器又上圖可以看出，能夠獲得單色性較好的激發(fā)光并消除其他雜散光干擾。
正確了解熒光分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)，也是能夠幫助我們更好使用和操作，一定要仔細(xì)閱讀哈~
熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等很多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長(zhǎng)掃描范200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。
熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡(jiǎn)便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。
熒光分光光度計(jì)使用說明：
開機(jī)時(shí)，請(qǐng)先開氙燈電源，再開主機(jī)電源。每次開機(jī)后請(qǐng)先確認(rèn)一下一起兩邊排熱風(fēng)扇工作正常，以確保儀器正常工作，發(fā)現(xiàn)風(fēng)扇有故障，應(yīng)停機(jī)檢查。
主機(jī)工作時(shí)頂部排熱器溫度很高,切勿觸摸,以免受傷.氙燈點(diǎn)亮后需一定時(shí)間穩(wěn)定，故進(jìn)行精密測(cè)試應(yīng)在30分鐘以上。當(dāng)氙燈未能觸發(fā)，并連續(xù)發(fā)生“吱吱”高頻聲或“叭叭”打火聲時(shí)，請(qǐng)立即關(guān)掉氙燈電源，稍后數(shù)秒重新觸發(fā)。請(qǐng)盡量減少不必要的氙燈觸發(fā)次數(shù)，避免氙燈在高壓下反復(fù)觸發(fā)。
封閉氙燈電源后，若要重新使用，請(qǐng)等待60秒以后重新觸發(fā)。運(yùn)行未知濃度的樣品測(cè)試時(shí)，靈敏度設(shè)置請(qǐng)從低位向高圍（0-7）逐步設(shè)置，當(dāng)靈敏度較高時(shí)（>3），為了保護(hù)光電倍增管，請(qǐng)擁護(hù)勿將強(qiáng)光置進(jìn)樣品室內(nèi)。當(dāng)（僅當(dāng)）操縱者錯(cuò)誤操縱或其他干擾引起微機(jī)錯(cuò)誤時(shí)，應(yīng)該立即關(guān)斷主機(jī)電源，重新啟動(dòng)，但無須關(guān)斷氙燈電源。單色器內(nèi)用螺絲緊固處不得松動(dòng)，光學(xué)器件和儀器運(yùn)行環(huán)境需保護(hù)清潔。清潔儀器外表時(shí),請(qǐng)勿使用乙醇乙MI等有機(jī)溶劑,請(qǐng)勿在工作中清潔,不使用時(shí)請(qǐng)加防塵罩.比色皿保持清潔。
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