紫外分析儀是熒光技術(shù)的應(yīng)用,熒光技術(shù)是什么呢? 首先了解一下什么是熒光,熒光又作"螢光",是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。
當(dāng)某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長(zhǎng)的入射光(通常是紫外線或X射線)照射,吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài),并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的的波長(zhǎng)長(zhǎng)的出射光(通常波長(zhǎng)在可見光波段);而且一旦停止入射光,發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即消失。
具有這種性質(zhì)的出射光就被稱之為熒光。知道了什么是熒光,顧名思義就能想到什么是熒光技術(shù)。
熒光技術(shù)是某些物質(zhì)受一定波長(zhǎng)的光激發(fā)后,在極短時(shí)間內(nèi)(10-8秒)會(huì)發(fā)射出波長(zhǎng)大于激發(fā)波長(zhǎng)的光,這種光稱為熒光。這一發(fā)光現(xiàn)象在各方面的應(yīng)用及有關(guān)的方法稱為熒光技術(shù)(fluorescent technique)。
物質(zhì)經(jīng)過(guò)紫外線照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種情況,第一種是自發(fā)熒光,如葉綠素、血紅素等經(jīng)紫外線照射后,能發(fā)出紅色的熒光,稱為自發(fā)熒光;第二種是誘發(fā)熒光,即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過(guò)紫外線照射發(fā)出熒光,稱為誘發(fā)熒光。
熒光技術(shù)在生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究中應(yīng)用主要包括以下幾個(gè)方面:
1、物質(zhì)的定性:不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜,因此可用熒光進(jìn)行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比,熒光法具有更高的選擇性。
2、定量測(cè)定:利用在較低濃度下熒光強(qiáng)度與樣品濃度成正比這一關(guān)系可以定量分析樣品中熒光組分的含量,常用于測(cè)定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。
熒光定量測(cè)定的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高,例如維生素B2的測(cè)定限量可達(dá)1毫微克/毫升,這一優(yōu)點(diǎn)使測(cè)定時(shí)所需要樣品量大大減少。
這種定量測(cè)定方法還可應(yīng)用于酶催化的反應(yīng),只要反應(yīng)前后有熒光強(qiáng)度的變化,就可用來(lái)測(cè)定酶的含量及酶反應(yīng)的速率等。
3、研究生物大分子的物理化學(xué)特性及其分子的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象:熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數(shù)不僅和分子內(nèi)熒光發(fā)色基團(tuán)的本身結(jié)構(gòu)有關(guān),而且還強(qiáng)烈地依賴于發(fā)色團(tuán)周圍的環(huán)境,即對(duì)周圍環(huán)境十分敏感。
利用此特點(diǎn)可通過(guò)測(cè)定上述有關(guān)熒光參數(shù)的變化來(lái)研究熒光發(fā)色團(tuán)所在部位的微環(huán)境的特征及其變化。
在此研究中,除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團(tuán)(如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等,此類熒光稱為內(nèi)源熒光)以外,可將一些特殊的熒光染料分子共價(jià)地結(jié)合或吸附在生物大分子的某一部位,通過(guò)測(cè)定該染料分子的熒光特性變化來(lái)研究生物大分子,這種染料分子被稱為"熒光探針",它們發(fā)出的熒光一般稱為外源熒光。
熒光探針的應(yīng)用,大大地開拓了熒光技術(shù)在分子生物學(xué)中的應(yīng)用范圍。
4、利用熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數(shù)可以研究生物大分子中的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象:通過(guò)該現(xiàn)象的研究,可以獲得生物大分子內(nèi)部的許多信息。
首先我們要了解紫外分析儀運(yùn)用的是熒光技術(shù)。
而所謂熒光,是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。
當(dāng)某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長(zhǎng)的入射光(通常是紫外線或X射線)照射,吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài);
并發(fā)出比入射光的的波長(zhǎng)長(zhǎng)的出射光(通常波長(zhǎng)在可見光波段);
而且一旦停止入射光,發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即消失,而能有這種性質(zhì)的出射光便是熒光。
熒光技術(shù)便是某種物質(zhì)受某種波長(zhǎng)的光激發(fā)后,在極短時(shí)間內(nèi)(8-10秒)會(huì)發(fā)射出波長(zhǎng)大于激發(fā)波長(zhǎng)的熒光;
而與這種發(fā)光現(xiàn)象相關(guān)的應(yīng)用與方法便是熒光技術(shù)。
紫外分析儀便是利用熒光技術(shù)中,不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的物理定性,然后通過(guò)這種物理定性進(jìn)行物質(zhì)的鑒別。
紫外分析儀的實(shí)際應(yīng)用范圍一般有:
1.在科學(xué)實(shí)驗(yàn)工作中檢測(cè),紫外分析儀可以對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)工作中的許多物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核苷酸等進(jìn)行鑒別分析。
2.在藥物生產(chǎn)和研究中,紫外分析儀可以用來(lái)檢查生物堿、維生素等各種能產(chǎn)生螢光藥品質(zhì)量的物質(zhì)。
并且紫外分析儀特別適宜作薄層分析、紙層分析斑點(diǎn)和檢測(cè)。
3.在染料涂料橡膠、石油等化學(xué)行業(yè)中,紫外分析儀可以測(cè)定各種螢光材料、螢光指示劑及添加劑,以及鑒別不同種類的原油和橡膠制品。
4.在紡織化學(xué)纖維中可以用于測(cè)定不同種類的原材料。
紫外分析儀可以用來(lái)檢測(cè)如羊毛、真絲人造纖維、棉花合成纖維等,以及檢查成品的質(zhì)量。
5.在糧油、蔬菜、食品部門食品檢測(cè)中。
紫外分析儀可用于檢查毒素(如黃qu霉素等)、食品添加劑、變質(zhì)的蔬菜、水果、可可豆肪、巧克力、脂肪、蜂蜜等的質(zhì)量。
6.在地質(zhì)、考古等部門的研究中。
紫外分析儀可以起到發(fā)現(xiàn)各種礦物質(zhì)、判別文物化石真?zhèn)蔚淖饔谩?/p>
7.在相關(guān)部門調(diào)查研究中,紫外分析儀可檢查指痕測(cè)定、密寫字跡等,幫助相關(guān)部門辦理案件。
日常維護(hù)保養(yǎng)方法:
1.紫外分析在使用時(shí)應(yīng)該注意使用環(huán)境。
在不使用時(shí),紫外分析儀應(yīng)放置在陰涼、干燥、無(wú)灰塵和無(wú)酸堿、蒸汽的地方,并且拔下電源插頭,并蓋上防護(hù)罩。
2.不要將水和液體濺到紫外分析儀上。
3.紫外分析儀的燈箱上放置被觀察物的紫玻璃和黑板上如果有污穢,可用酒精棉球擦干凈。
1、物質(zhì)的定性:不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜,因此可用熒光進(jìn)行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比,熒光法具有更高的選擇性。
2、定量測(cè)定:利用在較低濃度下熒光強(qiáng)度與樣品濃度成正比這一關(guān)系可以定量分析樣品中熒熒光技術(shù)在免疫學(xué)中亦有廣泛的應(yīng)用。比較重要的就是熒光抗體法。將某些熒光染料與血清抗體相結(jié)合,這種標(biāo)記的抗體仍可專一地與相應(yīng)抗原發(fā)生結(jié)合,形成的復(fù)合體具有熒光特性,從而可以確定抗原或抗體的存在及其含量。
利用熒光技術(shù)設(shè)計(jì)的紫外分析儀主要是物質(zhì)的定性方面的應(yīng)用,包括:
1、在科學(xué)實(shí)驗(yàn)工作中檢測(cè),許多主要物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核苷酸等。
2、在藥物生產(chǎn)和研究中,可用來(lái)檢查激素生物堿,維生素等各種能;產(chǎn)生熒光藥品質(zhì)量,特別適宜作薄層分析和紙層分析斑點(diǎn)和檢測(cè)。
3、在染料涂料橡膠、石油等化學(xué)行業(yè)中,測(cè)定各種熒光材料,熒光指示劑及添加劑,鑒別不同種類的原油和橡膠制品。
4、紡織化學(xué)纖維中可測(cè)定不同種類的原材料。如羊毛,真絲人造纖維,棉花,合成纖維,并可檢查成品質(zhì)量。
5、在糧油,蔬菜,食品部門,可用于檢查毒素(如黃曲霉素等),食品添加劑,變質(zhì)的蔬菜、水果、可可豆、巧克力、脂肪、蜂蜜、糖蛋等的質(zhì)量。
6、在地質(zhì)、考古等部門,可起到發(fā)現(xiàn)各種礦物質(zhì),判別文物化石的真?zhèn)巍?/p>
7、在公安部門可檢查指紋、測(cè)定密寫字跡等。