熒光的原理是某些物質(zhì)會在高強(qiáng)度的短波長光線照射下，會發(fā)出波長稍長的發(fā)射光（熒光）。而我們一般都是觀察被激發(fā)熒光基團(tuán)所發(fā)射出來的波長稍長的發(fā)射光（熒光）。
但是激發(fā)的光會很強(qiáng)，所以我們就需要把激發(fā)的光全部濾去，這樣才可以看到熒光基團(tuán)的發(fā)射光（熒光）。
熒光顯微鏡一般都用高強(qiáng)度的汞燈做激發(fā)光源。使用濾色片把不需要的光濾去，只留下激發(fā)熒光集團(tuán)的高強(qiáng)度很純的光線。這個(gè)單色的光線通過物鏡照射到樣本上之后，樣本會被激發(fā)出發(fā)射光（熒光），熒光和激發(fā)光都會沿著物鏡光路返回，這樣的話，就需要用一個(gè)二相色鏡把激發(fā)光濾去，只讓我們需要看到的熒光透過。
這個(gè)熒光沿著顯微鏡的光路最后到達(dá)目鏡下，然后進(jìn)入我們的眼睛，我們就可以看到熒光基團(tuán)所發(fā)出來的熒光了。
熒光顯微鏡的預(yù)檢查和調(diào)節(jié)：
(1)每次進(jìn)行熒光觀測前，必須例行檢查熒光裝置的燈絲對中、光路對焦、孔徑光闌、視場光闌設(shè)置等狀況。
(2)所需要的熒光激發(fā)/發(fā)射濾光片組件是否已裝在轉(zhuǎn)換器中，熒光顯微鏡物鏡配置是否得當(dāng)，除去物鏡前透鏡的油漬和灰塵。
(3)如同時(shí)進(jìn)行透射光相差觀察，要檢查聚光鏡對中心及相差環(huán)與物鏡相反的共軛情況。
(4)檢查樣品載體(載玻片、蓋玻片和其他器皿)有否掛有液體、灰塵，厚度是否在物鏡標(biāo)定的工作距離范圍內(nèi)。切片樣品不能太厚，約≤10μm為宜。
(5)因照明光源含有紫外線，在載物臺前上方放一塊棕色遮光板，以防紫外線損傷視網(wǎng)膜。
(6)電壓不穩(wěn)會降低高壓汞燈的使用壽命，光源電源加配穩(wěn)壓器。
(7)為延長汞燈壽命，在開啟后15min方可關(guān)閉；汞燈熒光電源一旦關(guān)閉，再次啟動至少需等待10min，以使水銀蒸汽冷卻復(fù)至原態(tài)，否則會影響燈的壽命。
熒光顯微鏡的像觀察：
(1)在開啟熒光燈源后約5～10min激發(fā)光強(qiáng)度趨于穩(wěn)定，裝載樣品進(jìn)行觀察；為防止在調(diào)焦和尋找物像過程中過度激發(fā)光照會造成樣品熒光淬滅，先通過縮小熒光顯微鏡的孔徑光闌或加ND濾光片將激發(fā)光調(diào)節(jié)到適度強(qiáng)度，有規(guī)律地移動樣品臺，待確定鏡像后，在調(diào)節(jié)到熒光狀態(tài)用于拍攝記錄。
(2)鏡像質(zhì)量不佳的調(diào)整。排除樣品制備因素外，可進(jìn)行的必要調(diào)節(jié)措施是：
?、倥懦上窆饴分械恼诠饣蛳薰馄骷鏒IC附件、ND濾光片等。
?、谥匦抡{(diào)節(jié)熒光顯微鏡的收光器對焦和孔徑光闌大小。
?、奂?xì)心調(diào)節(jié)熒光顯微鏡物鏡覆蓋差校正環(huán)。
熒光顯微鏡的應(yīng)用要點(diǎn)
熒光顯微鏡是利用“光化熒光”成像，如果所選激發(fā)波長在肉眼所看不見的近紫外光區(qū)(320～400nm)，熒光的發(fā)射光譜也較普通光鏡光源的平均波長短，光學(xué)分辨率提高。高能量的光子與電子碰撞，使得電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。激發(fā)態(tài)的電子很不穩(wěn)定，會重新回落到基態(tài)，這個(gè)過程中會消耗部分熱能，并發(fā)出新的光子。新的光子能量比起初的光子能量低，因此波長更長。由于新的光子波長區(qū)別于入射光的光子波長，通過一定的光學(xué)處理方法將兩束不同波長的光分開，從而使我們只看到發(fā)射出來的新光子（熒光信號），也就是熒光顯微鏡看到的熒光圖像。
熒光顯微鏡是熒光顯微檢測的專用工具，它是光學(xué)顯微鏡的一種。它除了具有光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)和光學(xué)放大作用外，基于熒光的特性，還具備以下獨(dú)特的功能要求:
1、提供足夠能量的能激發(fā)出熒光的光源。
2、有著適應(yīng)不同物質(zhì)所需的激發(fā)光譜一組濾色片，從光源中選擇合適的激發(fā)光譜，使析出的光譜與該物質(zhì)的吸收光譜重合，以期望獲得最大的熒光。
3、為獲得較弱的熒光圖像，還要建立一套截止濾色片，它使所需觀察的熒光進(jìn)入系統(tǒng)成像，而將其余的光波，包括發(fā)射光阻擋在外，用來提高圖像的襯度。
4、放大的光學(xué)系統(tǒng)應(yīng)適應(yīng)熒光的特性，最終獲得既能觀察又能攝影的高亮度、高分辨力的良好襯度的熒光圖像。
5、儀器的安全性。應(yīng)用汞燈要防止紫外線的泄漏和汞燈的爆炸，保證電器安全。
熒光顯微鏡具備專業(yè)領(lǐng)先的熒光成像技術(shù)，高精度盤式熒光模組和多波段LED模組可選，以滿足各類細(xì)胞、病理切片及更多廣泛的觀察需求，是實(shí)驗(yàn)室儀器的選擇。
熒光顯微鏡特點(diǎn)如下：
1、多波段熒光LED 落射照明器
轉(zhuǎn)盤式熒光中間模組，較多可同時(shí)使用B1、G1、UV2 三個(gè)熒光模塊和明場通道，使用方便舒適，有效提高濾光片切換速度。
前側(cè)擋光板可防止微弱的紫外光對人體的影響，右側(cè)裝有光源亮度調(diào)節(jié)旋鈕，外置 6V2A 電源，可選配EX30BB 充電電池盒。
2、半復(fù)消熒光物鏡
全新一代無限遠(yuǎn)平場半復(fù)消色差專業(yè)熒光物鏡，卓越的像差校正性能，超大數(shù)值孔徑設(shè)計(jì)，比普通平場物鏡的數(shù)值孔徑高達(dá)25%，使圖像亮度更強(qiáng)，圖像分辨率更高。
熒光顯微鏡采用優(yōu)質(zhì)環(huán)保光學(xué)材料，熒光觀察時(shí)，圖像鮮艷清晰。應(yīng)用先進(jìn)的多層寬帶鍍膜技術(shù)，在波段的寬度上和紫外光的透過率方面具有明顯優(yōu)勢，是各類細(xì)胞、病理切片專業(yè)熒光觀察的選擇。
3、盤式濾塊切換機(jī)構(gòu)
全新設(shè)計(jì)的高精度盤式濾塊切換機(jī)構(gòu)，濾塊位置一致，更換方便靈活，較多可同時(shí)安裝六個(gè)熒光濾光塊。
熒光顯微鏡選用無漂移的高性能熒光濾光片系統(tǒng)，確保FISH實(shí)驗(yàn)的結(jié)果精確無誤。光譜透過率高，濾片無穿色現(xiàn)象，具有極高的信噪比，熒光成像襯度大幅提升。
濾光塊采用背景雜光消除技術(shù)，觀察時(shí)呈現(xiàn)圖片與背景的超高對比度，達(dá)成觀察效果。
4、高效照明系統(tǒng)
熒光顯微鏡選用高級SiO2 石英材料，抗腐蝕，紫外透過率高，使得照明更加均勻，亮度更高。
采用耐高溫復(fù)合工程塑料進(jìn)行隔熱設(shè)計(jì)，有效地阻止燈源熱量向機(jī)身傳遞。設(shè)有可變視場光闌，中心可調(diào)，可以有效地減少雜散光，獲得的觀察效果。
5、汞燈電源
全新數(shù)字式電源控制系統(tǒng)，帶有使用時(shí)間計(jì)數(shù)器、電流值顯示器，幫助用戶進(jìn)行汞燈使用狀態(tài)的判斷。
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