紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同；
因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。
若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測定條件要相同。
實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。
應(yīng)用：
在水和廢水監(jiān)測中的應(yīng)用，對于一個(gè)水系的監(jiān)測分析和綜合評價(jià)，一般包括水相(溶液本身)、固相(懸浮物、底質(zhì))、生物相(水生生物)。
在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測中，紫外可見分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復(fù)雜多變，待測物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時(shí)必須選擇好分析方法。
在農(nóng)產(chǎn)品和食品分析中可用于檢測的組分或成分有蛋白質(zhì)、賴氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等；
在植物生化分析中可用于檢測葉綠素、全氮和酶的活力等；
在飼料分析中可用于檢測煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。
紫外可見分光光度計(jì)引用新型技術(shù)，其功能強(qiáng)大，采用單色器技術(shù)，波長范圍190-1100nm，是各種涉及水和廢水分析領(lǐng)域的通用儀器，應(yīng)用范圍包括市政和工業(yè)廢水，飲用水，加工過程用水，地表水，冷卻水和鍋爐補(bǔ)給水等。
紫外可見分光光度計(jì)應(yīng)用：
在水和廢水監(jiān)測中的應(yīng)用，對于一個(gè)水系的監(jiān)測分析和綜合評價(jià)，一般包括水相（溶液本身）、固相（懸浮物、底質(zhì)）、生物相（水生生物）。在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測中，紫外可見分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復(fù)雜多變，待測物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時(shí)必須選擇好分析方法。
在農(nóng)產(chǎn)品和食品分析中可用于檢測的組分或成分有蛋白質(zhì)、賴氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等;
在植物生化分析中可用于檢測葉綠素、全氮和酶的活力等；
在飼料分析中可用于檢測煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。
紫外可見分光光度計(jì)維護(hù)要點(diǎn)：
一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降;造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正。應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。
二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也會影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵等。
三、儀器使用一定周期后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，建議由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤滑，最后，恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。
目前,紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來介紹。紫外可見分光光度計(jì)在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。最主要的是以下5個(gè)方面。
1.蛋白質(zhì)分析工作中
紫外可見分光光度計(jì)在蛋白質(zhì)的分析中,最主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm,所以,采用光度測量模式,將儀器的波長GOTO到蛋白質(zhì)的最大吸收峰波長280nm上,測試其吸光度大小,就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
2.核酸分析工作中
紫外可見分光光度計(jì)在核酸分析中的應(yīng)用,主要是用來對核酸的定量檢測;因?yàn)楹怂岬奈辗逶?60nm。我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計(jì)的波長GOTO到核酸的最大吸收峰260nm上,測試其吸光度大小就是了。
3.氨基酸分析工作中
紫外可見分光光度計(jì)在氨基酸分析中的應(yīng)用,主要是用來對氨基酸的定量檢測。因?yàn)榘被釋ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為230nm,所以,我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO到氨基酸的最大吸收峰230nm上,就可測試其吸光度大小,從而計(jì)算出氨基酸的含量。但是,因?yàn)榘被岱治鰰r(shí),一般是將它溶解在水中,而水在230nm附近有很多干擾吸收線,所以,在用紫外可見分光光度計(jì)對氨基酸分析檢測時(shí),要注意防止干擾的問題。此外,還需注意:只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收,多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱,測定時(shí)要衍生化后再測。
4.糖類分析測試工作中
紫外可見分光光度計(jì)在糖的分析中,主要是作定量檢測。因?yàn)樘菍ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為218nm,所以,對糖類進(jìn)行分析時(shí),只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO到氨基酸的最大吸收峰218nm上,就可測試其吸光度大小,從而計(jì)算出糖的含量。
5.多糖分析測試工作中
紫外可見分光光度計(jì)在多糖的分析中,主要也是作定量檢測。因?yàn)槎嗵菍ψ贤夤獾闹饕詹ㄩL為206nm,所以,我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO到多糖的最大吸收峰206nm上,就可測試其吸光度大小,從而計(jì)算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因?yàn)?在206nm處的時(shí)候,光源(氘燈)的能量已經(jīng)很弱,儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低,光電倍增管的靈敏度也很低,206nm左右的干擾也很大。所以,用紫外可見分光光度計(jì)作多糖的分析是很難的事,目前許多科學(xué)家正在研究中。
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