流式細(xì)胞儀是進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器，集電子、計算機、激光、流體理論于一體，被譽為試驗室的“CT”。

    流式細(xì)胞術(shù)(Flow CytoMeter, FCM)是一種在功能水平上對單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測手段；

    它可高速分析上萬個細(xì)胞，并能同時從一個細(xì)胞中測得多個參數(shù)，與傳統(tǒng)熒光鏡檢查相比；

    具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點，成為當(dāng)代zui先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)。

    工作原理

    將待測細(xì)胞染色后制成單細(xì)胞懸液。

    用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細(xì)胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度；

    這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區(qū)域。

    流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。

    經(jīng)過聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下，產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。

    這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。

    光散射信號在前向小角度進(jìn)行檢測，這種信號基本上反映了細(xì)胞體積的大小;熒光信號的接受方向與激光束垂直；

    經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光信號。

    這些熒光信號的強度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度；

    經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號，再通過A/D轉(zhuǎn)換器，將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號。

    計算機把所測量到的各種信號進(jìn)行計算機處理，將分析結(jié)果顯示在計算機屏幕上，液可以打印出來；

    還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進(jìn)一步分析。

    檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇。

    單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達(dá)，其X軸為測量強度，Y軸為細(xì)胞數(shù)目。

    一般來說，流式細(xì)胞儀坐標(biāo)軸的分辨率有512或1024通道數(shù)，這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定。

    對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù)，既可以單獨顯示每個參數(shù)的直方圖；

    也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖。

    細(xì)胞的分選是通過分離含有單細(xì)胞的液滴而實現(xiàn)的。

    在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體，充電后振動；

    使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測定細(xì)胞就分散在這些液滴之中。

    將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時；

    在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細(xì)胞的分離。