二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)通常采用兩種方式控制箱體內(nèi)濕度。一是采用被動控濕法，即通常的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)均放置一個3L的水盤，內(nèi)盛3L無菌純水，37度的溫度，水自然蒸發(fā)，使箱體內(nèi)濕度達到95%。二是一些高級的二氧化碳培養(yǎng)箱，采用主動加濕系統(tǒng)(蒸汽發(fā)生器，加熱水盤，噴霧器等)，可以 控制箱體內(nèi)的濕度，如低溫培養(yǎng)時（低溫二氧化碳培養(yǎng)箱）就需要主動加濕的方法。
水盤污染控制問題：這種高濕度條件下，放置在箱體內(nèi)部的水盤中的純凈水，很容易造成微生物的滋生，產(chǎn)生污染，導致細胞培養(yǎng)完全失敗。
目前，控制水盤內(nèi)污染的方法有如下幾種：
1、定期(至少每兩周一次)，更換水盤內(nèi)的無菌蒸餾水或無菌去離子水。
2、在水盤內(nèi)添加適量硫酸銅，配制方法：20g無水硫酸銅＋5ml濃硫酸＋1L滅菌純水。
3、夏季氣溫高時，水盤里加0.02％的疊氮鈉可以有效的預防真菌污染。
4、水盤內(nèi)添加適量抗生素。
5、定期為培養(yǎng)箱(含水盤)進行一次高溫滅菌。
6、使用專用的水盤污染控制試劑，如市面上有些CO2培養(yǎng)箱廠家提供水盤污染控制專用的銀離子消毒盒，說明書上描述能有效殺滅600中微生物，能持續(xù)使用6個月，但此類專用污染控制試劑較常規(guī)方法，存在價格較昂貴缺點。采用主動加濕的方式就不存在污染問題。
二氧化碳培養(yǎng)箱是開展免疫學、腫瘤學、遺傳學及生物工程所必須的關(guān)鍵設(shè)備，廣泛應(yīng)用于細胞、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng)，常見于細胞動力學研究、哺乳動物細胞分泌物的收集、各種物理、化學因素的致癌或毒理效應(yīng)、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細胞生產(chǎn)抗體、體外授精（IVF）、干細胞、組織工程、藥物篩選等研究領(lǐng)域。
對于細胞來說，非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存，培養(yǎng)箱本身是不會辨別的，而細胞培養(yǎng)中大部分時間里細胞都是位于培養(yǎng)箱內(nèi)，因此二氧化碳培養(yǎng)箱體內(nèi)能否抑菌或滅菌非常關(guān)鍵!
病毒：由于病毒寄生生存，爆發(fā)后盡快和正常細胞隔離，丟棄處理，相對來說容易處理，對操作者威脅較大;盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
真菌（霉菌和酵母菌）：真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了;目前沒有好的抑制方法，包括現(xiàn)在常用的兩性霉素，一旦污染容易反復爆發(fā)，尤其孢子很難殺滅。
支原體：支原體污染后，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞已經(jīng)受到多方面潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，抑制細胞生長等，往往被大多數(shù)實驗者忽視。
細菌：細菌污染后，培養(yǎng)基1-2天就會變色，對細胞生長影響明顯，應(yīng)迅速將污染細胞與其它細胞系隔離，滅菌后丟棄，還要用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺。
二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境。
二氧化碳培養(yǎng)箱的三個工作原理：
一、濕度的控制
因培養(yǎng)物需工作室內(nèi)保持一定的濕度時，二氧化碳培養(yǎng)箱配有水盤。用戶可在培養(yǎng)時將水盤放入工作室內(nèi)，水盤加上適量的蒸餾水讓其在工作室內(nèi)自然蒸發(fā)，一般相對濕度可達95%。
二、溫度的控制
二氧化碳培養(yǎng)箱溫度控制器由鉑電阻作為傳感器與數(shù)字控制電路、LED數(shù)字顯示電路等組成，當傳感器輸出與溫度成正比的電阻信號轉(zhuǎn)換成電壓信號經(jīng)電路放大后，一路送至顯示電路顯示實測溫度。另一路送至比較器與設(shè)定值比較。當二者產(chǎn)生偏差時，觸發(fā)可控硅功率管輸出功率使加熱管產(chǎn)生熱量。當偏差減小直至為零時，其加熱管發(fā)出的熱量亦隨之減小，直至停止加熱?？刂凭€路中有超溫及水位報警功能。當顯示溫度超過設(shè)定值2.0℃時，溫度控制器發(fā)出聲光報警信號，同時切斷輸出，停止加熱，防止溫度繼續(xù)上升；當水箱內(nèi)水位過高或過低時，水位控制器發(fā)出聲光報警信號，同時切斷加熱輸出。僅水套式CO2箱具有水位報警功能！
三、氣路的控制
氣路由高濃度的CO2鋼瓶、氣泵、穩(wěn)壓閥、針型閥，電磁閥、流量計及儲氣瓶等組成。(高濃度的CO2鋼瓶由用戶自備)。當輸入一定壓力的高濃度CO2氣體，通過調(diào)節(jié)閥、針閥及電磁閥的流量、時間控制，保證一定量的CO2氣體進入工作室，達到自動控制工作室內(nèi)的CO2濃度值。該值同時通過顯示電路顯示，便于觀察了解。為方便用戶在使用中進行濃度的監(jiān)視和采樣，在CO2箱的后背面裝有采樣、監(jiān)視口。因采用了快慢速雙重充氣法，使CO2箱在開、關(guān)門后，工作室內(nèi)的CO2濃度能快速恢復且無過沖現(xiàn)象。在CO2箱工作過程中，由儲氣瓶對工作室內(nèi)進行補氣，以保持穩(wěn)定的CO2濃度值。
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