常見的PCR儀有四種類型，分別是普通基礎(chǔ)PCR儀，梯度PCR儀，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和原位PCR儀。這四種PCR儀的一般原理有相似的地方，但在結(jié)構(gòu)和配件方面還存在一些差異。那么它們有哪些異同點(diǎn)呢？
PCR儀不同分類的對比
(1)普通基礎(chǔ)PCR儀由主機(jī)，加熱模塊，PCR管樣品基座，熱蓋，控制軟件組成。
(2)梯度PCR儀除具有普通PCR儀的結(jié)構(gòu)外，還具有特殊的梯度模塊，可實(shí)現(xiàn)對梯度溫度和梯度時(shí)間等參數(shù)的調(diào)整。因此可以在一次實(shí)驗(yàn)中對不同樣品設(shè)置不同的退火溫度和退火時(shí)間，從而可在短時(shí)間內(nèi)對PCR實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，提高PCR科研效率。
(3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)。熒光檢測系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源和檢測器。激發(fā)光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發(fā)光二極管LED光源，前者可配多色濾光鏡實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長，而單色發(fā)光二極管LED價(jià)格低、能耗少、壽命長，不過因?yàn)槭菃紊?，需要不同的LED才能更好地實(shí)現(xiàn)不同激發(fā)波長。監(jiān)測系統(tǒng)有超低溫CCD成像系統(tǒng)和PMT光電倍增管，前者可以一次對多點(diǎn)成像，后者靈敏度高但一次只能掃描一個(gè)樣品，需要通過逐個(gè)掃描實(shí)現(xiàn)多樣品檢測，對于大量樣品來說需要較長的時(shí)間。
(4)原位PCR儀與普通PCR儀相比，用玻片代替了PCR管，其反應(yīng)過程是在載玻片的平面上進(jìn)行的。
PCR儀器不是一種計(jì)量儀器，其主要作用原理與基本計(jì)量要素密切相關(guān)，要求較高，一旦失控，儀器將不能正常工作，所以PCR儀器也需要定期檢測和維護(hù)，這對依賴自然風(fēng)降溫的PCR儀器尤為重要。
下面介紹一些具體的保養(yǎng)維護(hù)方法：
1．樣品池的清洗先打開蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開PCR儀，設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運(yùn)行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5～10min即可。
2．熱蓋的清洗對于熒光定量PCR儀，當(dāng)有熒光污染出現(xiàn)，而且這一污染并非來自樣品池時(shí)，或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時(shí)，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔干凈，無污物阻擋光路。3．儀器外表面的清洗清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進(jìn)行清洗。4．更換保險(xiǎn)絲先將PCR儀關(guān)機(jī)，拔去插頭，打開電源插口旁邊的保險(xiǎn)盒，換上備用的保險(xiǎn)絲，觀察是否恢復(fù)正常。
在儀器的維護(hù)保養(yǎng)中，需要注意以下問題：
1)PCR儀器需要定期檢測，視制冷方式而定一般半年至少一次。
2)PCR反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的，當(dāng)檢測發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1～2℃時(shí)，可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應(yīng)溫度差。
3)PCR反應(yīng)過程的關(guān)鍵是升、降溫過程的時(shí)間控制，要求越短越好，當(dāng)PCR儀的降溫過程超過60s，就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng)，對風(fēng)冷制冷的PCR儀要較徹底地清理反應(yīng)底座的灰塵；對其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
4)一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時(shí)，不要輕易打開或調(diào)整儀器的電子控制部件，必要時(shí)要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。
根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測的標(biāo)準(zhǔn)可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等幾類。
1、普通PCR儀
一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行。主要是用作簡單的，對目的基因退火溫度的擴(kuò)增。
主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)、檢疫等。
2、梯度PCR儀
一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)臵一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同的DNA片段其比較適合的退火溫度不同，通過設(shè)臵一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的比較適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這樣既節(jié)約時(shí)間，也節(jié)約經(jīng)費(fèi)。在不設(shè)臵梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。真正的梯度，是每一排管都有精確的加熱控溫探頭，2009年為止只有美國ABI公司可以做到。其他的都是從兩頭的熱傳遞來設(shè)計(jì)控溫。
梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。
3、原位PCR儀
?。ㄓ行┢放频腜CR儀具有普通PCR、梯度PCR、原位PCR的功能，通過替換模塊進(jìn)行多用途開展實(shí)驗(yàn)工作）
是用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀。如病原基因在細(xì)胞的位臵或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位臵等?？杀３旨?xì)胞或組織的完整性，使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞的靶DNA所在的位臵進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測到靶DNA，還能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位臵。于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實(shí)用價(jià)值。
4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（fluorescencerquantitivepolymerasechainreaction,FQPCR)
在普通PCR儀設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR擴(kuò)增原理相同，在PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記，使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。
熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候，選用單通道；有多種熒光標(biāo)記的時(shí)候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因?yàn)橐淮沃荒軝z測一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，實(shí)現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀＋實(shí)時(shí)熒光定量試劑+通用電腦+自動(dòng)分析軟件，構(gòu)成PCR-DNA/RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測系統(tǒng)。
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