1、液相色譜儀整機(jī)保養(yǎng)
?。?）短期停機(jī)
在完成一天工作以后，都要停機(jī)等第二天再繼續(xù)工作，則可按以下步驟停機(jī)。
A）關(guān)閉二次儀表（記錄儀、積分儀或色譜工作站）。
B）關(guān)閉檢測(cè)器電源（同時(shí)切斷柱箱溫度檢測(cè)器的電源）。
C）停止恒流泵工作，然后切斷其電源。
D）用二次蒸餾水沖洗進(jìn)樣閥的進(jìn)樣孔（在“LOAD”和“INJECT”兩個(gè)位置）。
E）切斷實(shí)驗(yàn)室工作電源，加滿盛液瓶中的流動(dòng)相，待第二天使用。
F）將儀器罩上防塵罩。
?。?）長(zhǎng)期停機(jī)
液相色譜儀數(shù)周或數(shù)月暫不使用，這時(shí)除按《短期停機(jī)》的A）～D）步驟處理外，還須完成以下步驟：
A）拆下恒流泵的流動(dòng)相盛液瓶，換上色譜柱指定的保護(hù)試劑（例：甲醇、去離子水等），開啟泵數(shù)分鐘（流速0.5mL/min~1.5mL/min）后停泵。
B）從系統(tǒng)中拆下色譜柱，用專用的密封螺帽將柱管兩端密封后保存。
C）用普通φ1.6導(dǎo)管替代分離柱聯(lián)結(jié)。
D）用二次蒸餾水或去離子水輸入輸液泵，開啟泵，流量1mL/min~2mL/min，沖洗泵體、進(jìn)樣閥、檢測(cè)器流通池?cái)?shù)分鐘，在沖洗過(guò)程切換六通閥數(shù)次，使定量管得到清洗。
E）拆除替代柱的導(dǎo)管、泵輸入端和出口的導(dǎo)管和流通池輸入、輸出口導(dǎo)管，分別用螺帽密封輸液泵出口和流通池輸入、輸出口。
F）撥下總電源接線板的插頭，貯存好專用的流動(dòng)相和樣品，用干布擦洗儀器，罩上防塵罩。
G）檢測(cè)器存放地點(diǎn)應(yīng)干燥
2、液相色譜儀輸液泵的保養(yǎng)
輸液泵是液相色譜儀的心臟部件，品質(zhì)再好的泵，若不注意日常保養(yǎng)，其損壞的幾率是極高的，將大大降低儀器的使用價(jià)值。
a)使用甲醇作流動(dòng)相，請(qǐng)注意自身保護(hù)和環(huán)境保護(hù)，廢液注入空瓶?jī)?nèi)，集中處理，不得倒入下水道內(nèi)。
b)輸液泵使用前，先注意探漏檢查，視各密封點(diǎn)和泵體有否漏液。
c)在無(wú)流動(dòng)相通入的情況下，嚴(yán)禁啟動(dòng)泵體電機(jī)，以免柱塞密封環(huán)磨損。
d)測(cè)試泵流量性能時(shí)，用于收集液體的容器，應(yīng)選用小口瓶頸的容器，防止收集過(guò)程中，溶液蒸發(fā)，影響測(cè)量精度。，必要時(shí)應(yīng)將其密封存放在干燥容器內(nèi)，以預(yù)防光學(xué)系統(tǒng)霉變。
e)金屬泵體的輸液泵，應(yīng)盡量避免使用含有鹵離子（如KCL、NaCL、NH4CL）的流動(dòng)相或能產(chǎn)生鹵離子的流動(dòng)相，若必須使用此類流動(dòng)相，建議使用泵體用非金屬材料制造的輸液泵。方則使用后，應(yīng)立即使用去離子水清洗泵體和整個(gè)色譜系統(tǒng)的管路。
f)使用的流動(dòng)相必須是HPLC級(jí)或分析純級(jí)，特別是配置的流動(dòng)相，在使用前，必須過(guò)濾掉其中的顆粒狀雜質(zhì)和其他物質(zhì)（使用0.45μm的濾膜過(guò)濾）
g)長(zhǎng)期不使用輸液泵，應(yīng)在最后分析結(jié)束時(shí)，用注射器吸取去離子水通過(guò)專用的泵頭清洗孔清洗泵體和柱塞桿。以延長(zhǎng)密封圈和寶石柱塞桿的壽命。
h)輸液泵液路在維修或保養(yǎng)時(shí)，應(yīng)切斷儀器電源。非專業(yè)維修人員請(qǐng)不要打開機(jī)箱罩。
液相色譜儀的應(yīng)用，可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來(lái)說(shuō)，沸點(diǎn)在450℃以下，相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%～20%，其余的80%～85%有機(jī)物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護(hù)，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
反沖色譜柱，一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效，預(yù)柱和保護(hù)柱，選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)，由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理，利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料：經(jīng)過(guò)制備處理后，用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒，通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管：內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm，長(zhǎng)250mm。
色譜柱：也稱固定相，是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的，色譜柱的填充，干法填充：在硬臺(tái)面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺(tái)面墩10-20次。
濕法填充：又稱淤漿填充法，使用專門的填充裝置。
氣相色譜儀或液相色譜儀操作中，當(dāng)儀器的操作條件保持不變時(shí)，任一物質(zhì)的色譜峰總是在色譜圖上固定的位置出現(xiàn)，即有一定的保留值。又包含：死時(shí)間，保留時(shí)間，校下保留時(shí)間，保留體積等等。
在液相色譜儀中保留值定性的方法主要是用直接與已知標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照的方法。當(dāng)未知峰的保留值（t'R或V'R）與某一已知標(biāo)準(zhǔn)物完全相同時(shí)，則未知峰可能與此已知標(biāo)準(zhǔn)物是同一物質(zhì)，特別是在改變色譜柱或改變洗脫液的組成時(shí)，未知峰的保留值與已知標(biāo)準(zhǔn)物的保留值仍能完全相同，則可以基本上認(rèn)定未知峰與標(biāo)準(zhǔn)物是同一物質(zhì)。
在利用保留值數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)和定性分析時(shí)要特別注意到：由于液相色譜柱的填柱技術(shù)較復(fù)雜，液相色譜儀所使用的色譜柱的重現(xiàn)性目前還很不理想，即使是同一批號(hào)的柱子，重現(xiàn)性也不一致，這就使得使用保留值數(shù)據(jù)進(jìn)行分析受到限制。因此，目前保留值數(shù)據(jù)只能作為定性分析的參考。可以根據(jù)這些數(shù)據(jù)和對(duì)樣品的了解來(lái)選用已知標(biāo)準(zhǔn)物，再用這些已知標(biāo)準(zhǔn)物與未知物在同一色譜條件下直接進(jìn)行對(duì)比。
簡(jiǎn)單的保留值定性方法是將已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加到樣品中去，若使某一峰增高，而且在改變色譜柱或洗脫液的組成后，仍能使這個(gè)峰增高，則可基本認(rèn)定這個(gè)峰所代表的組分與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為同一物質(zhì)。
目前一些液相色譜儀儀器配備了三維圖譜檢測(cè)器，如二極管陣列檢測(cè)器，在進(jìn)行未知組分與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)比對(duì)時(shí)，除了比較保留時(shí)間外，還可以比較兩個(gè)峰的立體圖形。如在使用二極管陣列檢測(cè)器時(shí)，除了比較未知組分與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間外，還可比較兩者的紫外光譜圖，如果保留時(shí)間一樣，兩者的紫外光譜圖也完全一樣，則可基本上認(rèn)定兩者是同一物質(zhì)；若保留時(shí)間雖一樣，但兩者的紫外光譜圖有較大差別，則兩者不是同一物質(zhì)。這種利用三維圖譜比較對(duì)照的方法大大提高了保留值比較定性方法的準(zhǔn)確性。美國(guó)Bio-Rad公司的血藥分析儀（Remeeli）就是依靠三維圖譜的綜合數(shù)據(jù)的分析來(lái)鑒別未知藥物的。
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