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液相色譜儀的使用維護(hù)及故障排除及解決方案

時間:2020-05-10    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【中國儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進(jìn)行先分離,而后分析鑒定的儀器。
  

  一、泵的使用和維護(hù)
  
  1、防止固體微粒進(jìn)入泵內(nèi)。因為塵?;蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞桿、密封環(huán)、缸體和單向閥。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒,輸液棒的濾器經(jīng)常清洗或更換。
  
  2、流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)。例如氯仿、丙酮、二氯甲烷等,這些溶劑將會Peek樹脂部件變脆;還有含有鹵離子的流動相或能產(chǎn)生鹵離子的流動相,如果使用了,分析結(jié)束后,應(yīng)立即用去離子水清洗整個管路,因鹵離子會腐蝕不銹鋼部件或管路。流動相含有緩沖鹽不應(yīng)停泵保留在泵內(nèi)時間過長,由于蒸發(fā)甚至由于溶液的凈置就可能析出晶體。
  
  3、泵工作時要注意流動相不要被用完,否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)會加快磨損柱塞桿和密封圈。輸液泵的壓力不要太高,否則會使密封圈變形,降低密封圈使用壽命。
  
  4、在使用雙泵過程中,如果不是梯度洗脫,盡量先混合。如果一個是有機(jī)溶劑,一個是含鹽溶液,在用雙泵的時候,有可能會析出晶體。
  
  5、在使用緩沖鹽作流動相實驗結(jié)束之前和結(jié)束后,都要用含10%甲醇水溶液沖洗管路,不能用純水沖洗,因純水會對柱子造成損壞。進(jìn)樣閥要用適宜的溶劑進(jìn)行清洗。
  
  二、色譜柱的使用和維護(hù)
  
  1、避免壓力和溫度的急劇變化以及機(jī)械震動。在進(jìn)樣的時候,進(jìn)樣閥扳手不能轉(zhuǎn)動太慢,更不能停留在中間,如停留在中間,泵內(nèi)壓力劇增,這時再轉(zhuǎn)動到進(jìn)樣位置時,過高的壓力會損壞色譜柱。如出現(xiàn)機(jī)械震動(掉在地上)則會改變填料的充填狀態(tài)。
  
  2、在使用色譜柱過程中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑到水,反之,也不要從水直接改變到有機(jī)溶劑。
  
  3、色譜柱一般不能反沖,除非生產(chǎn)者指明。
  
  4、沖洗色譜柱時,每種溶劑至少沖洗50ml。
  
  5、裝在機(jī)子上的色譜柱,應(yīng)每隔4~5天沖洗15分鐘,可以避免長菌,保護(hù)色譜柱。
  
  6、PH的調(diào)節(jié)盡量在2~9之間
  
  7、保存色譜柱時,柱接頭要擰緊。
  
  三、輸液泵產(chǎn)生故障及排除方法
  
  1、沒有流動相流出,又無壓力顯示。原因可能是泵內(nèi)有大量氣體,這時打開排液閥,使泵在較大流量下運(yùn)轉(zhuǎn),將氣體排出,也可用一個針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個原因使密封圈損壞。
  
  2、壓力和流量不穩(wěn)。原因①可能有氣泡;②單向閥污染,可卸下單向閥,浸入異丙醇內(nèi)超聲清洗;③沙濾棒內(nèi)有雜質(zhì)或微生物堵塞,可將沙濾棒浸入流動相中超聲清洗,也可將濾頭放入4mol/l硝酸溶液中,迅速除去微生物。也可能是鹽堵塞,可放入水中清洗;④在線過濾器堵塞⑤進(jìn)樣閥損壞;⑥密封圈性能不好。
  
  3、壓力過高。①管路堵塞;②保護(hù)柱堵塞;③檢測池堵塞,發(fā)生情況立即停泵,否則會損壞流通池。
  
  四、與檢測器有關(guān)的故障及其排除
  
  1、流通池內(nèi)有氣泡。如果有氣泡連續(xù)不斷通過檢測池,將其噪音增大。如有較大氣泡,則會在基線上出現(xiàn)許多線狀“峰”,可加大流量排出氣體。如果檢測池有停留的氣泡,可采用突然增大流量的方法排除氣體(不連接色譜柱)。
  
  2、檢測池被污染。檢測池被污染了,可能產(chǎn)生噪音,或基線漂移,可以使用適當(dāng)溶劑清洗,如果污染嚴(yán)重,就可以用1mol/l硝酸溶液、水和新鮮溶劑進(jìn)行清洗。
  
  3、光源燈出現(xiàn)故障。檢測器的光遠(yuǎn)燈不能滿足正常樣品分析時,可能產(chǎn)生嚴(yán)重噪音污染,基線漂移,出現(xiàn)異常峰,甚至基線不回零。
  
  4、出現(xiàn)倒峰。如果流動相有紫外吸收的雜質(zhì),使用紫外檢測器時,就會產(chǎn)生倒峰,必須用高純度的溶劑作為流動相。檢測器的極性接反了,也會出現(xiàn)倒峰。

液相色譜故障處理

  液相色譜儀利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進(jìn)行先分離,而后分析鑒定的儀器。一般問題主要有以下幾種;

  氣泡溢出

  流動相內(nèi)有氣泡,關(guān)閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進(jìn)入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團(tuán),阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。

  柱壓高

 ?、啪彌_液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi);

  ⑵樣品污染沉積。

  處理對于第一種情況先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子,再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

  無指示

 ?、疟?font color="#0268CA">密封墊圈磨損;

 ?、拼罅繗馀葸M(jìn)入泵體。

  處理對于第一種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

  不穩(wěn)定

  原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

  峰分叉

  ⑴色譜柱被污染;

  ⑵柱頭填料塌陷。

  處理對于第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

  重復(fù)性差

 ?、胚M(jìn)樣閥漏液;

 ?、萍訕俞槻坏轿?;

 ?、且毫坎蛔?。

  處理對于第一種情況更換進(jìn)樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機(jī)鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞;色譜柱作好標(biāo)記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。

標(biāo)簽: 液相色譜
液相色譜 液相色譜故障處理_液相色譜

高效液相色譜分析原理

  高效液相色譜和氣相色譜在基本理論方面沒有顯著不同,它們之間的重大差別在于作為流動相的液體與氣體之間的性質(zhì)的差別。
  高效液相色譜分析原理:
  一、高效液相色譜分析的流程:由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng),然后輸出,經(jīng)流量與壓力測量之后,導(dǎo)入進(jìn)樣器。被測物由進(jìn)樣器注入,并隨流動相通過色譜柱,在柱上進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測器,檢測信號由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理,并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復(fù)雜的混合物分離極性范圍比較寬、還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似,不同的是氣相色譜改變溫度,而HPLC改變的是流動相極性,使樣品各組分在較佳條件下得以分離。
  二、高效液相色譜的分離過程:同其他色譜過程一樣,HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。
  二、高效液相色譜的分離過程:同其他色譜過程一樣,HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。
  開始樣品加在柱頭上,假設(shè)樣品中含有3個組分,A、B和C,隨流動相一起進(jìn)入色譜柱,開始在固定相和流動相之間進(jìn)行分配。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留,較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時間長,較晚流出色譜柱。組分B的分配系數(shù)介于A,C之間,第二個流出色譜柱。若一個含有多個組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng),則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱,達(dá)到分離之目的。
  不同組分在色譜過程中的分離情況,首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異,這是熱力學(xué)平衡問題,也是分離的首要條件。其次,當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動時,譜帶隨柱長展寬,分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關(guān)。所以分離最終效果則是熱力學(xué)與動力學(xué)兩方面的綜合效益。

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高效液相色譜 高效液相色譜分析原理_高效液相色譜

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