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【PCR儀】PCR儀保養(yǎng)維護方法 PCR儀維修保養(yǎng)

時間:2020-05-12    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     



    PCR儀器不是一種計量儀器,其主要作用原理與基本計量要素密切相關(guān),要求較高,一旦失控,儀器將不能正常工作,所以PCR儀器也需要定期檢測和維護,這對依賴自然風(fēng)降溫的PCR儀器尤為重要。

    下面介紹一些具體的保養(yǎng)維護方法:

    1.樣品池的清洗先打開蓋子,然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸干剩余液體;打開PCR儀,設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運行,讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5~10min即可。

    2.熱蓋的清洗對于熒光定量PCR儀,當(dāng)有熒光污染出現(xiàn),而且這一污染并非來自樣品池時,或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時,需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面,確保樣品池的孔干凈,無污物阻擋光路。3.儀器外表面的清洗清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂,但達不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進行清洗。4.更換保險絲先將PCR儀關(guān)機,拔去插頭,打開電源插口旁邊的保險盒,換上備用的保險絲,觀察是否恢復(fù)正常。

    在儀器的維護保養(yǎng)中,需要注意以下問題:

    1)PCR儀器需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。

    2)PCR反應(yīng)的要求溫度與實際分布的反應(yīng)溫度是不一致的,當(dāng)檢測發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1~2℃時,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應(yīng)溫度差。

    3)PCR反應(yīng)過程的關(guān)鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當(dāng)PCR儀的降溫過程超過60s,就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng),對風(fēng)冷制冷的PCR儀要較徹底地清理反應(yīng)底座的灰塵;對其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。

    4)一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調(diào)整儀器的電子控制部件,必要時要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。






PCR儀的技術(shù)特性

  PCR儀即基因擴增儀,實際就是一個溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制。主要由外殼、變溫反應(yīng)腔、散熱系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、制冷系統(tǒng)、電子控制系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、人機界面等各部分組成。
  PCR儀的原理:
  利用升溫使DNA變性,用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進而達到基因復(fù)制的目的。
  PCR儀的技術(shù)特性:
  1、加熱模式:立體膜加熱技術(shù);
  2、制冷技術(shù):新一代“peltier”效應(yīng)“半導(dǎo)體熱泵制冷”;
  3、控溫及管理:16位微機智能式;
  4、單機操作,也可與電腦聯(lián)機使用,通過數(shù)據(jù)線可直觀顯示溫度變化曲線;
  5、溫度范圍廣,除基本功能外還具備停電保護,長時間高低溫處理,低溫培養(yǎng),循環(huán)套循環(huán)等各種增強功能,可用于各種條件要求的PCR實驗。
  PCR的分類:
  根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標(biāo)準(zhǔn)可以將PCR儀分為:普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類。
  1、普通PCR儀
  一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀,也就是傳統(tǒng)的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。普通PCR儀主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗、檢疫等。
  2、梯度PCR儀
  一次性PCR擴增可設(shè)置一系列不同的退火溫度條件的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其比較適合的退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的比較適合退火溫度進行有效的擴增。
  梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用,多應(yīng)用于科研、教學(xué)機構(gòu),檢驗、檢疫等。
  3、原位PCR儀
  原位PCR是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,而且還可以了解靶DNA存在于何種細胞中,更有利于探討靶DNA與細胞之間的關(guān)系。
  原位PCR儀主要應(yīng)用于:檢測外源性基因片段,提高檢出率,集中在病毒感染的檢查上;觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律、內(nèi)源性基因片段;檢測導(dǎo)入基因;遺傳病基因檢測。
  4、實時熒光定量PCR儀
  在普通PCR儀設(shè)計基礎(chǔ)上增加熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結(jié)果輸出。
  熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候,選用單通道;有多種熒光標(biāo)記的時候使用多通道。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
  熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。熒光定量檢測技術(shù)在臨床診斷方面很多,主要集中在各種病原體引起疾病的臨床診斷與優(yōu)生優(yōu)育相關(guān)的疾病以及肺結(jié)核等。

標(biāo)簽: PCR儀
PCR儀 PCR儀的技術(shù)特性_PCR儀

PCR儀的種類

  PCR擴增儀和實時熒光定量PCR儀,普通的PCR擴增儀又衍生出帶梯度PCR功能的梯度PCR儀、和帶原位擴增功能的原位PCR儀等等。

  梯度PCR儀

  一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因為被擴增的不同的DNApian段其比較適合的退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的比較適合退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約經(jīng)費。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。正真的梯度,是每一排管都有精確的加熱控溫探頭,2009年為止只有美國ABI公司可以做到。其他的都是從兩頭的熱傳遞來設(shè)計控溫。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機構(gòu)。

  原位PCR儀

  是用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細胞內(nèi)基因擴增儀。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內(nèi)的作用位置等??杀3旨毎蚪M織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,還能標(biāo)出靶序列在細胞內(nèi)的位置。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實用價值。

  實時熒光定量PCR儀

  在普通PCR儀設(shè)計基礎(chǔ)上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結(jié)果輸出。

  熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候,選用單通道;有多種熒光標(biāo)記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達產(chǎn)物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。

  實時熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。

標(biāo)簽: PCR儀
PCR儀 PCR儀的種類_PCR儀

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