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光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡有何區(qū)別 光學(xué)顯微鏡操作規(guī)程

時(shí)間:2020-05-15    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【中國(guó)儀器網(wǎng) 使用手冊(cè)】電子顯微鏡是以電子束為照明源,通過(guò)電子流對(duì)樣品的透射或反射及電磁透鏡的多級(jí)放大后在熒光屏上成像的大型儀器。光學(xué)顯微鏡利用可見(jiàn)光照明,將微小物體形成放大影像的光學(xué)儀器。概括起來(lái),電鏡與光鏡主要有以下幾個(gè)方面的區(qū)別:
 
 ?。?)照明源不同
 
  電鏡所用的照明源是電子槍發(fā)出的電子流,而光鏡的照明源是可見(jiàn)光(日光或燈光),由于電子流的波長(zhǎng)遠(yuǎn)短于光波波長(zhǎng),故電鏡的放大及分辨 率顯著地高于光鏡。
 
 ?。?)透鏡不同
 
  電鏡中起放大作用的物鏡是電磁透鏡(能在中央部位產(chǎn)生磁場(chǎng)的環(huán)形電磁線圈),而光鏡的物鏡則是玻璃磨制而成的光學(xué)透鏡。電鏡中的電磁透鏡共有三組,分別與光鏡中聚光鏡、物鏡和目鏡的功能相當(dāng)。
 
 ?。?)成像原理不同
 
  在電鏡中,作用于被檢樣品的電子束經(jīng)電磁透鏡放大后打到熒光屏上成 像或作用于感光膠片成像。其電子濃淡的差別產(chǎn)生的機(jī)理是,電子束作用于被檢樣品時(shí),入射電子與物質(zhì)的原子發(fā)生碰撞產(chǎn)生散射,由于樣品不同部位對(duì)電子有不同散射度,故樣品電子像以濃淡呈現(xiàn)。而光鏡中樣品的物像以亮度差呈現(xiàn),它是由被檢樣品的不同結(jié)構(gòu)吸收光線多少的不同所造成的。
 
 ?。?)分辨率
 
  光學(xué)顯微鏡因?yàn)楣獾母缮媾c衍射作用,分辨率只能局限于02-05um之間。電子顯微鏡因?yàn)椴捎秒娮邮鳛楣庠?,其分辨率可達(dá)到1-3nm之間,因此光學(xué)顯微鏡的組織觀察屬于微米級(jí)分析,電子顯微鏡的組織觀測(cè)屬于納米級(jí)分析。
 
 ?。?)景深
 
  一般光學(xué)顯微鏡的景深在2-3um之間,因此對(duì)樣品的表面光滑程度具有極高的要求,所以制樣過(guò)程相對(duì)比較復(fù)雜。掃描電鏡的精神則可高達(dá)幾個(gè)毫米,因此對(duì)樣品表面的光滑程度幾何沒(méi)有任何要求,樣品制備比較簡(jiǎn)單,有些樣品幾何無(wú)需制樣。體式顯微鏡雖然也具有比較大的景深,但其分辨率卻非常的低。
 
 ?。?)所用標(biāo)本制備方式不同
 
  電鏡觀察所用組織細(xì)胞標(biāo)本的制備程序較復(fù)雜,技術(shù)難度和費(fèi)用都較高,在取材、固定、脫水和包埋等環(huán)節(jié)上需要特殊的試劑和操作,后還需將包埋好的組織塊放人超薄切片機(jī)切成50~100nm厚的超薄標(biāo)本片。而光鏡觀察的標(biāo)本則一般置于載玻片上,如普通組織切片標(biāo)本、細(xì)胞涂片標(biāo)本、組織壓片標(biāo)本和細(xì)胞滴片標(biāo)本。
 
 ?。?)應(yīng)用領(lǐng)域
 
  光學(xué)顯微鏡主要用于光滑表面的微米級(jí)組織觀察與測(cè)量,因?yàn)椴捎每梢?jiàn)光作為光源因此不僅能觀察樣品表層組織而且在表層以下的一定范圍內(nèi)的組織同樣也可被觀察到,并且光學(xué)顯微鏡對(duì)于色彩的識(shí)別非常敏感和準(zhǔn)確。電子顯微鏡主要用于納米級(jí)的樣品表面形貌觀測(cè),因?yàn)閽呙桦婄R是依靠物理信號(hào)的強(qiáng)度來(lái)區(qū)分組織信息的,因此掃描電鏡的圖像都是黑白的,對(duì)于彩色圖像的識(shí)別掃描電鏡顯得無(wú)能為力。掃描電鏡不僅可以觀察樣品表面的組織形貌,通過(guò)使用EDS、WDS、EBSD等不同的附件設(shè)備,掃描電鏡還可進(jìn)一步擴(kuò)展使用功能。通過(guò)使用EDS、WDS輔助設(shè)備,掃描電鏡可以對(duì)微區(qū)化學(xué)成分進(jìn)行分析,這一點(diǎn)在失效分析研究領(lǐng)域由為重要。使用EBSD,掃描電鏡可以對(duì)材料的晶格取向進(jìn)行研究。

光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)的主要部分

  目鏡:將物鏡放大的實(shí)像進(jìn)一步放大成一個(gè)起立的虛像,其作用相當(dāng)于一個(gè)放大鏡,但是目鏡并不增加光學(xué)顯微鏡的分辨力。一般光學(xué)顯微鏡備有幾個(gè)放大倍數(shù)不同的目鏡,放大倍數(shù)會(huì)刻在目鏡邊緣,如5x、10x和15x等,臨床常用放大10x的目鏡?! ∥镧R:多數(shù)復(fù)式顯微鏡有3個(gè)或4個(gè)物鏡,每個(gè)物鏡的放大率都不同,多數(shù)物鏡的放大倍數(shù)包括:4x(掃描)、10x(低倍)、40x(高倍)和100x(油鏡)。物體的放大倍數(shù)為目鏡的放大倍數(shù)乘以物鏡的放大倍數(shù),如物體放置在4x的物鏡下,用10x目鏡觀察,鏡下的放大倍數(shù)為40x[(4x)X(10x)]。  聚光器:作用是會(huì)聚由反射鏡反射來(lái)的光線,增加標(biāo)本的照明,升降聚光器,可調(diào)節(jié)照明強(qiáng)度和改變對(duì)比度?! 」馊Νh(huán):由十余片金屬薄片組成,中心部分形成圓孔,通過(guò)旋轉(zhuǎn)光圈環(huán),可調(diào)節(jié)圓孔的大小,由此調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱?! 〈譁?zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋:調(diào)節(jié)物鏡與標(biāo)本之間的距離,使物鏡的焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)標(biāo)本,得到更清晰的圖像,粗準(zhǔn)焦螺旋旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒升降20mm,細(xì)準(zhǔn)焦螺旋每旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒升降0.1mm或更小。

標(biāo)簽: 光學(xué)顯微鏡
光學(xué)顯微鏡 光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)的主要部分_光學(xué)顯微鏡

光學(xué)顯微鏡的使用說(shuō)明

  光學(xué)顯微鏡的使用:

  1.顯微鏡的取送:①右手握鏡臂;②左手托鏡座;③置于胸前。

  2.顯微鏡的旋轉(zhuǎn):①鏡筒朝前,鏡臂朝后;②置于觀察者座位前的桌子上,偏向身體左側(cè),便于左眼向目鏡內(nèi)觀察;③置于桌子內(nèi)側(cè),距桌沿5cm左右。

  3.對(duì)光:①轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒徐徐上升,然后轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔;②用手指轉(zhuǎn)動(dòng)遮光器(或片狀光圈),使最大光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔,左眼向目鏡內(nèi)注視,同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡,使其朝向光源,使視野內(nèi)亮度均勻合適。

  4.低倍物鏡的使用:①用手轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒徐徐下降,同時(shí)兩眼從側(cè)面注視物鏡鏡頭,當(dāng)物鏡鏡頭與載物臺(tái)的玻片相距2~3mm時(shí)停止。②用左眼向目鏡內(nèi)注視(注意右眼應(yīng)該同時(shí)睜著),并轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒徐徐上升,直到看清物象為止。如果不清楚,可調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,至清楚為止。

  5.高倍物鏡的使用:使用高倍物鏡之前,必須先用低倍物鏡找到觀察的物象,并調(diào)到視野的正中央,然后轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器再換高倍鏡。換用高倍鏡后,視野內(nèi)亮度變暗,因此一般選用較大的光圈并使用反光鏡的凹面,然后調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。觀看的物體數(shù)目變少,但是體積變大。

  6.反光鏡的使用:反光鏡通常與遮光器(或光圈)配合使用,以調(diào)節(jié)視野內(nèi)的亮度。反光鏡有平面和凹面。對(duì)光時(shí),如果視野光線太強(qiáng),則使用反光鏡的平面,如果光線仍舊太強(qiáng),則同時(shí)使用較小的光圈;反之,如果視野內(nèi)光線較弱,則使用較大的光圈或使用反光鏡的凹面。

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