液相色譜中的許多問題都能在譜圖上反映出來，其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。而面對常常發(fā)現(xiàn)的HPLC譜圖異常的問題，如何做到真正解決問題，則需堅(jiān)持這幾個(gè)原則：一具體問題具體對待原則：二先外設(shè)后內(nèi)部原則：三由簡而繁原則：四單一處理到綜全處理原則。
一、拖尾峰
1、篩板阻塞:柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞，樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲，使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。
2、色譜柱塌陷:是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出，但是又還有一點(diǎn)柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。
3、有污染:即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。
4、流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤:如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對于堿性化合物，相對較低的PH值更有利于得到對稱峰。
二、前沿峰
1、樣品過載:被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來，形成前沿峰。降低樣品含量。
2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng):當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。
3、色譜柱損壞:色譜柱柱效損失，不能對物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。
4、假象前沿峰:在大峰前有小峰出現(xiàn),假象前沿峰，即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。
三、基線漂移
1、柱溫波動(dòng):即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)，通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器。
2、流動(dòng)相不均勻:流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。使用HPLC級的溶劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。
3、流通池被污染或有氣體:用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。
4、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化:更改配比或流速，為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
5、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì):以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
四、出現(xiàn)寬峰
1、塔板數(shù)降低:色譜柱污染或失效，造成塔板數(shù)降低。更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。
2、管路太長或管路內(nèi)徑太大:柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大。更換內(nèi)徑較小的短管路。
3、檢測器響應(yīng)過大:檢測器對反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大。減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池。
五、基線噪音
1、尖銳峰:在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣。流動(dòng)相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液:檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3、流動(dòng)相混合不完全:用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。
4、溫度影響:柱溫過高，檢測器未加熱。使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。
5、偶然噪聲:在同一條線上有其他電子設(shè)備，斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。采用精密級穩(wěn)壓電源。
六、分離度不夠
1、流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理:優(yōu)化梯度洗脫程序。
2、流動(dòng)相污染或變質(zhì):引起保留時(shí)間變化，重新配置流動(dòng)相。
3、保護(hù)柱或分析柱阻塞:去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析，如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱；如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖；如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?；如果問題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
色譜柱在使用前，可以進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是較佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
1、樣品的前處理：
a、可以使用流動(dòng)相溶解樣品。
b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。使用0.45?m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動(dòng)相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a、流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中)。
b、流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動(dòng)相流速的選擇：
因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當(dāng)選用較佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
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