在進(jìn)行液相色譜儀分析實(shí)驗(yàn)時(shí),流動(dòng)相再進(jìn)入儀器之前,必須使用超聲波清洗機(jī)進(jìn)行簡(jiǎn)單的除氣泡處理,以防對(duì)泵造成損害,對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成干擾。若在檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)液相色譜儀恒流泵里有氣泡,須及時(shí)進(jìn)行排除,排除高壓液相色譜儀泵中氣泡的方法如下。
1、首先,檢查流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶中的溶劑過(guò)濾頭是否阻塞。具體做法:將輸入三通器上的溶劑塑料連接管的卸下,將流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶置于高位,利用壓差使溶液流出。如果溶劑流的很順暢,說(shuō)明溶劑過(guò)濾頭是好的。如果是一滴一滴的流出,則說(shuō)明過(guò)濾頭阻塞,需要超聲清洗,復(fù)原。
2、用堵頭將儀器的高壓液流輸出口封住將色譜柱連在管路上、,可避免在抽液時(shí)將空氣抽入管路內(nèi)。將儀器所配的注射器及塑料連接管插到放空閥的導(dǎo)管上,逆時(shí)針旋開(kāi)放空閥旋鈕,抽液5-10mL,將泵的流速設(shè)定在每分鐘一毫升的流速。啟動(dòng)泵,觀察塑料連接管的流動(dòng)溶液是否還有氣泡。如沒(méi)有氣泡說(shuō)明從過(guò)濾頭到放空閥這一段已將氣泡排除。
3、將泵關(guān)閉,將堵頭從儀器的高壓液流輸出口去掉將色譜柱從管路上卸掉、使輸出口放空。順時(shí)針關(guān)閉放空閥旋鈕,將泵的流速設(shè)定在3-5mL的流速,將泵內(nèi)的阻尼器和壓力傳感器的氣泡趕出,流出溶液10-15mL將泵關(guān)閉。連接上色譜柱,將流速設(shè)定在每分鐘一毫升,啟動(dòng)泵,觀察壓力及壓力脈動(dòng)。
4、用水和異丙醇甲醇、交替沖洗泵的內(nèi)腔,使吸附在內(nèi)墻壁上的氣泡趕出。
5、應(yīng)用快速降壓法趕出氣泡:用小堵頭將泵的流動(dòng)相輸出口堵上,將流速設(shè)定在1毫升/分,將柱前壓力升至20Mpa左右,將排空閥快速打開(kāi),重復(fù)2~3即可。
1、反相柱
分別用甲醇:水=90:10,純甲醇(HPLC級(jí)),異丙醇(HPLC級(jí)),二氯甲烷(HPLC級(jí))等溶劑作為流動(dòng)相,依次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
2、正相柱
分別用正己烷(HPLC級(jí)),異丙醇(HPLC級(jí)),二氯甲烷(HPLC級(jí)),甲醇(HPLC級(jí))等溶劑做流動(dòng)相,順次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過(guò)高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。
3、離子交換柱
長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
另外,還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調(diào)回來(lái),但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。