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液相色譜儀的這些使用要點(diǎn)你做到了嗎 液相色譜操作規(guī)程

時(shí)間:2020-05-16    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【中國(guó)儀器網(wǎng) 使用手冊(cè)】色譜法,又稱“色層法”、“層析法”,早誕生于俄國(guó)植物學(xué)家——茨維特之手,后在此基礎(chǔ)上又相繼發(fā)展出薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法以及紙色譜法。目前,常見(jiàn)的液相色譜儀生產(chǎn)廠家有沃特世、安捷倫、島津、依利特、上海分析儀器廠、北京分析儀器廠等。
 
  在液相色譜儀開(kāi)機(jī)前,我們首先應(yīng)當(dāng)做好準(zhǔn)備工作,主要有配置試驗(yàn)要求的流動(dòng)相、安裝試驗(yàn)用的色譜、將流動(dòng)相過(guò)濾脫氣三點(diǎn)。流動(dòng)相的過(guò)濾,主要是為了除去流動(dòng)相中的微粒物質(zhì),所應(yīng)用到的濾膜可分脂溶性濾膜(有機(jī)濾膜)、水溶性濾膜與通用型濾膜。
 
  而流動(dòng)相的脫氣,則是為了流動(dòng)相防止在泵、流路、檢測(cè)器等儀器組成部分中產(chǎn)生氣泡,從而造成泵的不穩(wěn)定,并增加檢測(cè)器的噪音。據(jù)了解,氦氣脫氣、真空脫氣、超聲脫氣、加熱脫氣均可運(yùn)用于液相色譜儀的流動(dòng)相脫氣。脫氣的操作,需要以流動(dòng)相中的混合物濃度不發(fā)生變化為主要原則。
 
  另外,色譜柱的安裝調(diào)試,還涉及反相色譜柱與正相色譜柱兩種。反向色譜柱多以硅膠為基質(zhì),常以硅膠健合C18、C8為填料。值得一提的是,液相色譜儀還應(yīng)當(dāng)采用穩(wěn)定性較高的反相色譜柱。因?yàn)?,這種色譜柱還能夠承受酸與堿的作用。同時(shí),因存在著色譜儀遭受腐蝕的可能性,操作人員還應(yīng)當(dāng)勤勞更換每次試驗(yàn)用水,不使用鹵化物。后,為控制樣品在分析過(guò)程中的解離,操作人員還需注意反向色譜柱使用時(shí)的pH值,過(guò)高的pH值會(huì)溶解硅膠,過(guò)低的pH則會(huì)造成烷基的脫落。
 
  除上述幾個(gè)檢測(cè)的開(kāi)機(jī)準(zhǔn)備工作以外,儀器設(shè)備本身的質(zhì)量、色譜條件、操作人員技術(shù)熟練程度、儀器安裝環(huán)境,都是影響著液相色譜儀發(fā)揮作用的關(guān)鍵因素。不僅如此,儀器使用者還應(yīng)當(dāng)每三個(gè)月,就對(duì)液相色譜儀的清洗溶劑過(guò)濾器及溶劑瓶進(jìn)行清洗,以此來(lái)保證儀器長(zhǎng)時(shí)間、率的使用。

如何排除液相色譜儀高壓泵中的氣泡

  在進(jìn)行液相色譜儀分析實(shí)驗(yàn)時(shí),流動(dòng)相再進(jìn)入儀器之前,必須使用超聲波清洗機(jī)進(jìn)行簡(jiǎn)單的除氣泡處理,以防對(duì)泵造成損害,對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成干擾。若在檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)液相色譜儀恒流泵里有氣泡,須及時(shí)進(jìn)行排除,排除高壓液相色譜儀泵中氣泡的方法如下。

  1、首先,檢查流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶中的溶劑過(guò)濾頭是否阻塞。具體做法:將輸入三通器上的溶劑塑料連接管的卸下,將流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶置于高位,利用壓差使溶液流出。如果溶劑流的很順暢,說(shuō)明溶劑過(guò)濾頭是好的。如果是一滴一滴的流出,則說(shuō)明過(guò)濾頭阻塞,需要超聲清洗,復(fù)原。

  2、用堵頭將儀器的高壓液流輸出口封住將色譜柱連在管路上、,可避免在抽液時(shí)將空氣抽入管路內(nèi)。將儀器所配的注射器及塑料連接管插到放空閥的導(dǎo)管上,逆時(shí)針旋開(kāi)放空閥旋鈕,抽液5-10mL,將泵的流速設(shè)定在每分鐘一毫升的流速。啟動(dòng)泵,觀察塑料連接管的流動(dòng)溶液是否還有氣泡。如沒(méi)有氣泡說(shuō)明從過(guò)濾頭到放空閥這一段已將氣泡排除。

  3、將泵關(guān)閉,將堵頭從儀器的高壓液流輸出口去掉將色譜柱從管路上卸掉、使輸出口放空。順時(shí)針關(guān)閉放空閥旋鈕,將泵的流速設(shè)定在3-5mL的流速,將泵內(nèi)的阻尼器和壓力傳感器的氣泡趕出,流出溶液10-15mL將泵關(guān)閉。連接上色譜柱,將流速設(shè)定在每分鐘一毫升,啟動(dòng)泵,觀察壓力及壓力脈動(dòng)。

  4、用水和異丙醇甲醇、交替沖洗泵的內(nèi)腔,使吸附在內(nèi)墻壁上的氣泡趕出。

  5、應(yīng)用快速降壓法趕出氣泡:用小堵頭將泵的流動(dòng)相輸出口堵上,將流速設(shè)定在1毫升/分,將柱前壓力升至20Mpa左右,將排空閥快速打開(kāi),重復(fù)2~3即可。

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液相色譜儀 如何排除液相色譜儀高壓泵中的氣泡_液相色譜儀

高效液相色譜之色譜柱的清洗方法

  高效液相色譜是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來(lái)的分離分析技術(shù),是現(xiàn)代分離測(cè)定的重要手段。問(wèn)世以來(lái),因其具有分離效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。高效液相色譜柱是消耗品,會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加,出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰,柱效下降。需要定期進(jìn)行徹底清洗和再生,不同的色譜柱清洗方法各不相同比如:

  1、反相柱

  分別用甲醇:水=90:10,純甲醇(HPLC級(jí)),異丙醇(HPLC級(jí)),二氯甲烷(HPLC級(jí))等溶劑作為流動(dòng)相,依次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。

  2、正相柱

  分別用正己烷(HPLC級(jí)),異丙醇(HPLC級(jí)),二氯甲烷(HPLC級(jí)),甲醇(HPLC級(jí))等溶劑做流動(dòng)相,順次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過(guò)高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。

  3、離子交換柱

  長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

  另外,還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調(diào)回來(lái),但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。

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高效液相色譜 色譜柱 高效液相色譜之色譜柱的清洗方法_高效液相色譜 色譜柱

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