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制備型液相色譜儀應如何選擇操作條件 液相色譜操作規(guī)程

時間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【儀器網(wǎng) 使用手冊】制備型液相色譜儀目的是對產(chǎn)品的單體進行提取和純化,與蒸餾、萃取等純化方法相比制備型液相色譜法更有效,但對操作的要求也更高。為保證制備型液相色譜儀可以達到理想的實驗效果,需要謹慎選擇操作條件,減少影響分離效果的因素。
 
  色譜柱的選擇
 
  色譜柱的容量有一定限制,每種色譜柱都有自己的負載能力,因此樣品的導入值上限需要根據(jù)所用的色譜柱確定。色譜柱與大樣品量的關系如下:
 
  1.色譜柱內(nèi)半徑越大,柱子的負載能力越高。
 
  2.分配系數(shù)K增加,柱子的負載能力也會增加。同時,溶質(zhì)的保留體積同樣也會增加。
 
  3.色譜柱的填充方法影響著填充密度,用良好方法填充的柱子密度趨近它的大值,柱子的樣品量和分辨率同樣也會趨近大值。
 
  4.采用表面積大的吸附劑雖然會減弱色譜系統(tǒng)的速度和適用范圍,但可以增加柱子的負載能力。
 
  5.柱子的負載能力還隨著柱子的長度增加而增長,但柱子過長會損失柱效。
 
  6.填料顆粒的大小與柱子負載量也呈正相關關系。
 
  樣品的溶解
 
  樣品在溶劑里的溶解度會影響注入的大樣品量。在流動相里難溶解的物質(zhì)通常不能充分分離或分辨率比較低,因此需要先將樣品溶解在另一種溶劑中,再將這種溶液送人色譜分離系統(tǒng)。中間溶劑的選擇很重要,并且需要經(jīng)驗。
 
  流動相的純度
 
  流動相的純度與樣品中的純度息息相關。在分離組分特性相近或痕量組分時,流動相里的雜質(zhì)還可能污染色譜柱,影響分離效能。因此流動相須保證純凈。
 
  流動相的流速
 
  流動相的流速與分離速度、分離效率相關,流速越快分離速度越快,但分離效率越低,因此需要選擇合適的速度保證速度與效率并重。
 
  固定相的選擇
 
  為了分辨效果,應盡量選擇吸附色譜。從填料的容量看,全多孔型比表面多空型好;從固定相微粒的大小看,30~50μ較常用。

液相色譜儀5種常見故障及處理方法

  液相色譜儀是一種常用的分析儀器,主要由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成,被廣泛用于生物醫(yī)學、環(huán)境化學、石油化工等領域中。

  1、柱壓高原因

  (1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi);

  (2)樣品污染沉積。處理對于第一種情況先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

  2、氣泡溢出

  流動相內(nèi)有氣泡,關閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。

  3、既無壓力指示,又無液體流過

  (1)泵密封墊圈磨損;

  (2)大量氣泡進入泵體。處理對于第一種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

  4、壓力波動大,流量不穩(wěn)定

  原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

  5、出峰不佳,峰分叉

  (1)色譜柱被污染;

  (2)柱頭填料塌陷。處理對于第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

標簽: 液相色譜儀
液相色譜儀 液相色譜儀5種常見故障及處理方法_液相色譜儀

高效液相色譜儀峰面積差別很大的解決方法

  高效液相色譜儀分析中進樣基線很好,保留時間能鎖定,壓力也穩(wěn)定,但是峰面積差別很大,大概有2倍的差別,這種情況出現(xiàn)的原因可能是多方面的,建議采用以下方法解決:

  1、調(diào)換一根新色譜柱,如果情況一樣,則排除柱子的原因。

  2、將在線過濾器拆下,用超聲波清洗,如果結果一樣,說明與在線過濾器無關。

  3、考慮是不是進樣閥有問題或者定量環(huán)堵。建議多進幾針樣品,看是否有規(guī)律,如果沒有規(guī)律,應檢查一下進樣器的其他部位,如果是進樣器系統(tǒng)出現(xiàn)問題,應盡快解決之。

  4、對進樣器清洗一下,清洗干凈后先進一針空白,再進樣,看看結果如何,如果有明顯減少,那可能是進樣器污染,有樣品殘留在進樣閥體內(nèi),在切換的過程中被流動相帶入色譜柱。

  5、考慮樣品溶液是否均勻。建議同一個濃度連續(xù)進樣5次,看一下結果如何變化,有沒有規(guī)律;如果是樣品溶液不均勻,可以再攪拌一下。

  6、考慮光源是不是正常。

  7、考慮濃度是否在線性范圍內(nèi)。有時候定量時濃度太高或太低都會產(chǎn)生較大的分析誤差。

  8、考慮取樣方式是否正確,每次取樣后是否對針頭外面的附著液進行清除。

  9、高效液相色譜儀的計算機軟件編制可能存在問題。對比可以適當改變軟件。

標簽: 高效液相色譜儀
高效液相色譜儀 高效液相色譜儀峰面積差別很大的解決方法_高效液相色譜儀

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