菌落總數(shù)的測(cè)定，一般將被檢樣品制成幾個(gè)不同的10倍遞增稀釋液，然后從每個(gè)稀釋液中分別取出1mL置于滅菌平皿中與營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基混合，在一定溫度下，培養(yǎng)一定時(shí)間后（一般為48小時(shí)），記錄每個(gè)平皿中形成的菌落數(shù)量，依據(jù)稀釋倍數(shù)，計(jì)算出每克（或每ml）原始樣品中所含細(xì)菌菌落總數(shù)。
基本操作一般包括：樣品的稀釋－－傾注平皿－－培養(yǎng)48小時(shí)－－計(jì)數(shù)報(bào)告。
國內(nèi)外菌落總數(shù)測(cè)定方法基本一致，從檢樣處理、稀釋、傾注平皿到計(jì)數(shù)報(bào)告無何明顯不同，只是在某些具體要求方面稍有差別，如有的國家在樣品稀釋和傾注培養(yǎng)進(jìn)，對(duì)吸管內(nèi)液體的流速，稀釋液的振蕩幅度、時(shí)間和次數(shù)以及放置時(shí)間等均作了比較具體的規(guī)定。
檢驗(yàn)方法參見：
GB4789.2-94《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》
SN0168-92《中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出口食品菌落計(jì)數(shù)》
1．操作方法：培養(yǎng)到時(shí)間后，計(jì)數(shù)每個(gè)平板上的菌落數(shù)?？捎萌庋塾^察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)，計(jì)算處原始樣品中每克（或每ml）中的菌落數(shù)，進(jìn)行報(bào)告。
2．到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板放置于0－4℃，但不得超過24h。
3．計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)在30~300之間的平板（SN標(biāo)準(zhǔn)要求為25~250個(gè)菌落），若有二個(gè)稀釋度均在30~300之間時(shí)，按國家標(biāo)準(zhǔn)方法要求應(yīng)以二者比值決定，比值小于或等于2取平均數(shù)，比值大于2則其較小數(shù)字（有的規(guī)定不考慮其比值大小，均以平均數(shù)報(bào)告）。
4．若所有稀釋度均不在計(jì)數(shù)區(qū)間。如均大于300，則取最高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如均小于30，則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如菌落數(shù)有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之間，則應(yīng)以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如所有稀釋度均無菌落生長，則應(yīng)按小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。有的規(guī)定對(duì)上述幾種情況計(jì)算出的菌落數(shù)按估算值報(bào)告。
5．不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比（同一稀釋度的二個(gè)平板的菌落數(shù)應(yīng)基本接近），即稀釋倍數(shù)愈高菌落數(shù)愈少，稀釋倍數(shù)愈低菌落數(shù)愈多。如出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，則應(yīng)視為檢驗(yàn)中的差錯(cuò)（有的食品有時(shí)可能出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，如酸性飲料等），不應(yīng)作為檢樣計(jì)數(shù)報(bào)告的依據(jù)。
6．當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長時(shí)，如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯界限，則應(yīng)作為一個(gè)菌落計(jì)，如存在有幾條不同來源的鏈，則每條鏈均應(yīng)按一個(gè)菌落計(jì)算，不要把鏈上生長的每一個(gè)菌落分開計(jì)數(shù)。如有片狀菌落生長，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個(gè)平板的菌落數(shù)乘2代表全平板的菌落數(shù)。
7．當(dāng)計(jì)數(shù)平板內(nèi)的菌落數(shù)過多（即所有稀釋度均大于300時(shí)），但分布很均勻，可取平板的一半或1/4計(jì)數(shù)。再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)作為該平板的菌落數(shù)。
8．菌落數(shù)的報(bào)告，按國家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定菌落數(shù)在1~100時(shí)，按實(shí)有數(shù)字報(bào)告，如大于100時(shí)，則報(bào)告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計(jì)算。固體檢樣以克（g）為單位報(bào)告，液體檢樣以毫升（ml）為單位報(bào)告，表面涂擦則以平方厘米（cm2）報(bào)告。
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菌落計(jì)數(shù)器可減輕實(shí)驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度,提高工效和工作質(zhì)量。產(chǎn)品廣泛用于食品、飲料、藥品、生物制品、衛(wèi)生用品、飲用水、工業(yè)廢水、臨床標(biāo)本中細(xì)菌數(shù)的檢驗(yàn)。 菌落計(jì)數(shù)器注意事項(xiàng): 1、儀器應(yīng)放置在平整牢固的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上使用。 2、點(diǎn)數(shù)菌落時(shí)，探筆不要過于傾斜。輕輕點(diǎn)下至有彈跳感時(shí)，數(shù)字即被輸入。 3、儀器應(yīng)防潮、防強(qiáng)烈震動(dòng)、防直接日光曝曬、防酸堿侵蝕。用后應(yīng)加防塵罩。 4、注意防止細(xì)菌污染計(jì)數(shù)池。 5、儀器及探筆均不能隨意拆卸，發(fā)現(xiàn)故障，應(yīng)請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人員檢修。 菌落計(jì)數(shù)器是各級(jí)衛(wèi)生防疫站、環(huán)境監(jiān)測(cè)站、食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所、醫(yī)院、生物制品所、藥檢所、食品廠、日化廠及大專院校、科研單位實(shí)驗(yàn)室的必備儀器。 菌落計(jì)數(shù)器由計(jì)數(shù)器、探筆、計(jì)數(shù)池等部分組成，計(jì)數(shù)器采用CMOS集成電路精心設(shè)計(jì)，LED數(shù)碼管顯示，字高13mm，清晰明亮，配合專用探筆，計(jì)數(shù)靈敏準(zhǔn)確，菌落對(duì)比清楚。便于觀察。可廣泛用于食品、飲料、藥品、生物制品、化妝品、衛(wèi)生用品、飲用水、生活污水、工業(yè)廢水、臨床標(biāo)本中細(xì)菌數(shù)的檢驗(yàn)。那么菌落計(jì)數(shù)器都是怎樣進(jìn)行計(jì)數(shù)的呢？上海巴玖來為您詳細(xì)講解菌落計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)方法。 1.計(jì)數(shù)器測(cè)定法 即用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的(O.1mm3)，因而根據(jù)計(jì)數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，可計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。本法簡(jiǎn)便易行，可立即得出結(jié)果（本法不僅適于細(xì)菌計(jì)數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)）。 2.電子計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法 電子計(jì)數(shù)器的工作原理是測(cè)定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個(gè)細(xì)胞，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，形成一個(gè)脈沖，自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。 該法測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它只識(shí)別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。 3.活細(xì)胞計(jì)數(shù)法 常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法，是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高，是一種檢測(cè)污染活菌數(shù)的方法，也是目前國際上許多國家所采用的方法。使用該法應(yīng)注意：①一般選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，過多或過少均不準(zhǔn)確；②為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 廣泛應(yīng)用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細(xì)菌檢驗(yàn)，是常用的活菌計(jì)數(shù)法。 4.比濁法 比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量。細(xì)菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計(jì)測(cè)定菌液，用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。 此法簡(jiǎn)便快捷，但只能檢測(cè)含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對(duì)的細(xì)菌數(shù)目，對(duì)顏色太深的樣品，不能用此法測(cè)定。 5.測(cè)定細(xì)胞重量法 此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進(jìn)行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。此法適于菌體濃度較高的樣品，是測(cè)定絲狀真菌生長量的一種常用方法。 6.測(cè)定細(xì)胞總氮量或總碳量 氮、碳是細(xì)胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測(cè)定氮、碳的含量可以推知細(xì)胞的質(zhì)量。此法適于細(xì)胞濃度較高的樣品。 7、顏色改變單位法（colour change unit,簡(jiǎn)稱CCU） 這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無法計(jì)數(shù)的微生物，比如支原體等，因?yàn)橹гw的液體培養(yǎng)物是完全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計(jì)數(shù)，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計(jì)數(shù)，因此需要用特殊的計(jì)數(shù)方法，即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標(biāo)，來計(jì)數(shù)微生物的相對(duì)含量的。 以上就是菌落計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)方法，如果還想了解更多看有關(guān)注我們~菌落計(jì)數(shù)器的注意事項(xiàng)
菌落計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)方法
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