高效色譜儀色譜柱的使用事項(xiàng)包括色譜柱的平衡、再生和維護(hù)等。

    一、色譜柱的平衡：

    高效液相色譜儀反相色譜柱是保存在乙腈中，新柱應(yīng)先用10～20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱，一定確保分析樣品所使用的流動(dòng)相與乙腈－水互溶。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相平衡色譜柱，會(huì)在處理問題方面獲得最大的“補(bǔ)償”，而且色譜柱的壽命會(huì)變得更長(zhǎng)。

    平衡操作步驟：

    1、平衡開始時(shí)，將流速緩慢提高，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線。緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低，需要較長(zhǎng)時(shí)間來平衡。

    2、如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水“過渡”。即每天分析開始前，必須先用純水沖洗30min以上，再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡。分析結(jié)束后，必須先用純水沖洗30min以上，除去緩沖鹽之后，再用甲醇沖洗30min保護(hù)色譜柱。

    二、色譜柱的再生：

    1、建議用來沖洗色譜柱的溶劑體積：

    （1）Ф4×125mm色譜柱：

    柱體積為1.6mL，所用溶劑體積為30mL。

    （2）Ф4×250mm色譜柱：

    柱體積為3.2mL，所用溶劑體積為60mL。

    （3）Ф10×250mm色譜柱：

    柱體積為20mL，所用溶劑體積為400mL。

    2、再生方法：

    （1）極性固定相的再生：

    正庚烷，乙酸乙酯，丙酮，乙醇，水。

    （2）非極性固定相的再生：

    水，異丙醇，乙腈，水。

    3、注意事項(xiàng)：

    （1）在對(duì)用NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能以銨根離子形式存在，因此應(yīng)在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后用水沖洗至堿溶液完全流出。

    （2）如果用有機(jī)溶劑－水不能完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M的稀硫酸沖洗非常有效。

    三、色譜柱的維護(hù)：

    1、使用預(yù)柱、保護(hù)柱和分析柱。硅膠在極性流動(dòng)相和離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度。

    2、大多數(shù)反相色譜柱的pH值穩(wěn)定范圍是2～7.5，盡量不超過該色譜柱的pH值范圍。

    3、避免流動(dòng)相組成和極性的劇烈變化。

    4、流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理。

    5、如果使用極性或離子性緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢后沖洗干凈色譜柱，并保存于甲醇或乙腈中。

    6、氯化物溶劑對(duì)色譜柱有一定腐蝕，柱和連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。