??? 酶標(biāo)儀的檢測工作原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收了光中的紅色光譜。
酶標(biāo)儀檢測單位：
光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關(guān)系：
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來的光強度。
OD值由下述公式計算：
E＝OD=C×D×E
C為檢測物的濃度
D為檢測物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長，在此波長下，此物質(zhì)能夠吸收較多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波
長。
但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
Anthos 酶標(biāo)儀檢測值計算
儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進位數(shù)字信號，最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0％，沒有檢測物的透光值為100％。則實際檢測中，檢測物的透光值均在 0％一100％之間。透光值的計算如下：
T＝（Meas—Min）／（Max—Min）
其中T為透光值， Meas為檢測的二進位數(shù)值， Min為在 0％的情況下檢測的二進位數(shù)值， Max為在100％的情況下檢測的二進位數(shù)值，舉例如下：
MaX=3600 Mn=20 Meas＝30
T=（30-20）/3600-20）＝0．0028
OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552
Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位
儀器會自動對酶標(biāo)孔進行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。在對每一個酶標(biāo)儀進行檢測時，儀器其實要進行35個點的測量，選取最中間的5個點的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。
酶標(biāo)儀的用途和其它提示
用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實驗室，包括臨床實驗室。
質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進行質(zhì)量控制。
空白校正
有一些試劑盒的說陰書將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的，請按照試劑盒的說明書要求進行。
檢測結(jié)果的解釋
由于有相當(dāng)多的因素會影響檢測的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測試劑的體積，都會造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進行。
儀器網(wǎng)-專業(yè)分析儀器服務(wù)平臺,實驗室儀器設(shè)備交易網(wǎng),儀器行業(yè)專業(yè)網(wǎng)絡(luò)宣傳媒體。
相關(guān)熱詞：
等離子清洗機,反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計,露點儀,高效液相色譜儀價格,霉菌試驗箱,跌落試驗臺,離子色譜儀價格,噪聲計,高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測試儀型號,柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場強儀萬能材料試驗機價格,洗瓶機,勻漿機,耐候試驗箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。
一、測定波長目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時，DAB在450nm波長處有最大吸收，當(dāng)pH值降為L0時，最大吸收波長移至492nm,同時摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有最大消光系數(shù)，如果HRP量少，H:O:和TMB過量時，則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min.因此，450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的部件，可以同時安裝6~8片濾光片，所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個波長，有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大一般酶標(biāo)儀的測定波長在400~750nm或800nm之間，完全可以滿足ELISA的顯色測定。。除了這兩個基本濾光片外，考慮到雙波長比色的需要，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片，其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時，有的實驗室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴展了紫外檢測功能，此時需要一個340nm波長濾光片。此時，酶標(biāo)儀的測定波長范圍就成為340-750nm或800nm。酶標(biāo)儀有單波長和雙波長檢測功能有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定；而“雙波長”則除了用對顯色具最大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定外，同時用對特異顯色不敏感的波長如630nm進行測定，酶標(biāo)儀最后打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長下得到的吸光度是非特異的，來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測定中，可以使用雙波長，且不必設(shè)空白孔。
二、測定的吸光度范圍通常，酶標(biāo)儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標(biāo)儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。如Labsystems公司DragonWellscanMK-2的吸光度測定范圍為0-3.5，而MultiskanAscent的吸光度測定范圍(Abs)達0-4.0，在0-4.0范圍，線性誤差不超過±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi)，測定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0Abs范圍內(nèi)，測定精密度CV小于士0.2%。因此，對于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。
三、光學(xué)系統(tǒng)酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
下一篇：恒溫水浴的操作使用及注意事項
449717568
