分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,它是一種使用率很高的實(shí)驗(yàn)室儀器。常用于核算、蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。在印染方面,我們可以用分光光度計(jì)測(cè)量染色時(shí)燃料的上染百分率,以及整理在織的衣物上助劑的濃度,還可以用于顏色的測(cè)量。同時(shí)它還廣泛的應(yīng)用于食品檢測(cè)、農(nóng)藥的檢測(cè)以及工業(yè)上石油的檢測(cè)等,紫外可見光光分度在實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用非常廣泛。
分光光度計(jì)的組成
各種型號(hào)的可見分光光度計(jì),就其基本結(jié)構(gòu)來(lái)說(shuō),都是由五個(gè)部分組成的,即光源、單色器、洗手池、檢測(cè)器以及信號(hào)指示系統(tǒng)。如圖所示:
光源→單色器→吸收池→檢測(cè)器→信號(hào)顯示系統(tǒng)
分光光度計(jì)的基本原理
基于物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的選擇性吸收,不同的物質(zhì)都有各自的吸收光譜,當(dāng)光經(jīng)色散后的光譜通過(guò)某一溶液時(shí),其中某些波長(zhǎng)的光就會(huì)被溶液吸收。根據(jù)朗伯-比爾定律,當(dāng)一束平行單色光照射到一定濃度的均勻溶液時(shí),光強(qiáng)的減小程度和入射光的強(qiáng)度,溶液的濃度以及所透過(guò)溶液的長(zhǎng)度成正比,其公式為:T=I/I0 A=LogI0/I=Kbc
其中:T:透色比 I0:入射光強(qiáng) A:吸光度 I:頭色光強(qiáng)度 K:吸收系數(shù),1/mol/com b:液層厚,cm C:溶液的濃度,mol/l
光的吸收定律的使用范圍
光的吸收定律不僅適用于有色溶液,也適用于無(wú)色溶液及氣體和固體的非散射均勻體系,不僅適用于可見光的單色光,也適用于紫外和紅外光區(qū)的單色光,但應(yīng)注意,此定律僅適用于單色光和一定范圍的低濃度溶液。溶液濃度過(guò)大時(shí),透光性質(zhì)發(fā)生變化,從容使溶液對(duì)光的吸收度與溶液濃度不成正比關(guān)系,波長(zhǎng)交寬的混合光影響光的互補(bǔ)吸收,也會(huì)使測(cè)定產(chǎn)生誤差。
?
儀器網(wǎng)-專業(yè)分析儀器服務(wù)平臺(tái),實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備交易網(wǎng),儀器行業(yè)專業(yè)網(wǎng)絡(luò)宣傳媒體。
相關(guān)熱詞:
等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。
微量分光光度計(jì)能夠快速準(zhǔn)確的定量檢測(cè)核酸、蛋白質(zhì)等溶液。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl)、不用預(yù)熱、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置、樣品不需要稀釋等特點(diǎn),常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量,目前已成為眾多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器。
工作原理
超微量分光光度計(jì)進(jìn)行濃度測(cè)定的原理是根據(jù)朗伯-比爾(Lamber-Beer)定律,A=K·C·L 式中,A為吸光度;K為吸(消)光系數(shù);C為溶液的濃度;L為液層厚度。此公式說(shuō)明:在入射光一定時(shí),溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式,又叫朗伯-比爾定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計(jì)使用頻率最大的功能??梢远繙y(cè)定溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,具有紫外吸收的特性,最大的吸收波長(zhǎng)在260nm,吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度,分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評(píng)估樣品的純度,因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質(zhì)直接定量
這種方法是在280nm波長(zhǎng),直接測(cè)試蛋白。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測(cè)試較純凈、成分相對(duì)單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對(duì)于比色法來(lái)說(shuō),速度快,操作簡(jiǎn)單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,比色法測(cè)定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。
與傳統(tǒng)分光光度計(jì)相比,超微量分光光度計(jì)要求的樣品體積小,不需要比色皿,比色杯清洗方便,只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測(cè)平臺(tái)上擦拭干凈即可。除此之外,實(shí)驗(yàn)過(guò)程也更為簡(jiǎn)單,不需預(yù)熱,可隨時(shí)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果顯示吸光度值的同時(shí),程序直接給出濃度值。超微量分光光度計(jì)與傳統(tǒng)相比,體積更小,更方便使用。