細(xì)菌工程菌胞內(nèi)表達(dá)主要分為兩種形式，一種是在強(qiáng)啟動(dòng)子條件下的高效表達(dá)，由于蛋白的過(guò)度表達(dá);

    使蛋白不能及時(shí)有效折疊而發(fā)生無(wú)規(guī)則卷曲，以固體顆粒的形式堆積于胞間質(zhì)中，這就是所說(shuō)的包涵體;

    另外一種是間質(zhì)內(nèi)的可溶性表達(dá)，即可以發(fā)生正常折疊，具有生物活性。

    一般情況下，細(xì)菌只要被正常破壁就可以通過(guò)離心的形式將包涵體和可溶性表達(dá)的蛋白分離開(kāi)。

    超聲破碎的條件一般是300w，10s/10s，20分鐘，具體條件可根據(jù)自身情況而定。

    超聲前菌體的準(zhǔn)備：菌液離心后，先用PBS將菌沉淀洗2-3遍;

    然后按原菌液體積的1/5-1/10加入裂解液重懸菌體，裂解液的成分：

    50mMTris-HCl,pH8.0,2mMEDTA，100mMNaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%TritonX-100。切記冰浴超聲！

    如何判斷是否超聲完全，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，一般有以下幾個(gè)方面：

    1，外觀判斷：超聲前菌懸液是渾濁的，超聲完全后變的透明、清澈。

    2，液體的粘性：超聲后菌液從槍頭滴下不粘連。

    3，高速離心：有用高速離心檢測(cè)超聲破碎程度的（一般用6,000g10min,比一般離心收集菌體的轉(zhuǎn)速高一點(diǎn)）。沉淀是未破碎或破碎不完全的菌體。

    4，染色：破碎后的菌液涂片，革蘭氏結(jié)晶紫溶液染色0.5分鐘，鏡檢。

    （超聲后加入核酸酶消除核酸對(duì)蛋白的污染）

    一些需要注意的問(wèn)題：

    1，蛋白以包涵體形式表達(dá)，追求的是高破碎率，要求細(xì)胞碎片很小;

    而另一種蛋白是可溶形式表達(dá)，所以細(xì)胞碎片不能很小，兩種情況要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分離。

    2，如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀，說(shuō)明超聲功率太強(qiáng)。

    3，超聲時(shí)間太長(zhǎng)、功率太高對(duì)蛋白活性肯定有影響。

    4，盡量防止泡沫的產(chǎn)生。

    由于超聲波在液體中傳播時(shí)產(chǎn)生劇烈地?cái)_動(dòng)作用，使顆粒產(chǎn)生很大的加速度，從而互相碰撞或與器壁互相碰撞而擊碎。

    該作用亦足以使兩種不相溶液體混合均勻。

    由于該超聲波細(xì)胞粉碎儀能達(dá)到一般的機(jī)械攪拌或搗碎所達(dá)不到的效果；

    故在破碎動(dòng)植物組織、病毒細(xì)菌和其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)以及在乳化分離、均質(zhì)等化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中，超聲波細(xì)胞粉碎儀還被廣泛應(yīng)用在生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)制藥、食品檢測(cè)、環(huán)保監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。

    基于超聲波在液體中的空化作用，換能器將電能量通過(guò)變幅桿在工具頭頂部液體中產(chǎn)生高強(qiáng)度剪切力，形成高頻的交變水壓強(qiáng)，使空腔膨脹、爆炸將細(xì)胞擊碎。

    體積小攜帶方便；

    超聲探頭為進(jìn)口鈦合金材質(zhì)，經(jīng)久耐用；

    振幅自動(dòng)調(diào)節(jié)，在不同的負(fù)載狀況時(shí)振幅保持*；

    超聲波細(xì)胞粉碎儀采用微機(jī)控制，超聲功率連續(xù)可調(diào)；

    高能效換能器,確保功效強(qiáng)勁。