鬼峰產(chǎn)生的緣由是多種多樣的,根據(jù)本人的閱歷以及文獻報道,將緣由歸結(jié)為以下幾個方面:
1、活動相、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質(zhì),當梯度開端時由于有機相比例不高,洗脫才干不強,雜質(zhì)在色譜柱柱頭富集,隨著活動相比例變化,洗脫才干增強,富集的雜質(zhì)被洗脫,從而構(gòu)成鬼峰。
2、活動相脫氣不完好??諝庠谟袡C相和水中的溶解度不同,當水和有機相混合時,氣泡就產(chǎn)生了
3、操作問題
1、試劑問題
a) 有機溶劑
甲醇制備工藝相對乙腈來說較為簡單,雜質(zhì)含量也較少。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣,所以當運用紫外檢測器時,特別是波長較低時,盡量運用乙腈作為有機相,用甲醇的話漂移太大。而用作梯度色譜的乙腈質(zhì)量懇求較高,普通用進口梯度色譜專用乙腈能夠很好的減少鬼峰的呈現(xiàn)。
b) 水
很多單位用自制蒸餾水作為水相,但是結(jié)果并不是很好。緣由就是一些低沸點的有機雜質(zhì)并不能夠經(jīng)過蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級的純水,沒有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水替代,但是假設色譜條件比較嚴厲也是有可能出問題的。
c) 其它試劑
緩沖鹽、TFA、EDTA等試劑也會對活動相構(gòu)成很大的影響,盡量用純度高的試劑配制活動相。
2、儀器問題
a) 液相的活動相管路被污染。
長時間的運用含水量較高的活動相(特別是參與緩沖鹽的),細菌就容易在管路中滋生,細菌的代謝產(chǎn)物或是細胞碎片能構(gòu)成鬼峰。
b) 保送泵缺點,構(gòu)成系統(tǒng)壓力不穩(wěn),從而產(chǎn)生鬼峰。
c) 單向閥堵塞,構(gòu)成系統(tǒng)壓力不穩(wěn),從而產(chǎn)生鬼峰。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為活動相,往常應該曾經(jīng)得到改進。
1、 在線脫氣機脫氣不完好。
2、 兩種活動相的有機相比例相差太大。例如A為100%水,B為100%乙腈。在梯度條件允許的情況下盡量減少兩中活動相之間的差距,降低空氣在兩中活動相中溶解度的差異,從而減少氣泡的產(chǎn)生。
3、 活動相配置好后預先超聲脫氣。
1、活動相配置過程中遭到污染
a) 盛放活動相的容器或是量具遭到污染。
這種污染可能來自于洗濯劑、鉻酸洗液或是其他實驗人員用完后的殘留雜質(zhì)。活動相容器的清洗普通用干凈的水+有機溶劑涮洗就行,過多的清洗步驟反而可能構(gòu)成二次污染。有時活動相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質(zhì)的來源。
b) pH計。
很多pH計以聚碳酸酯作為外殼,但是聚碳酸酯是可以溶于有機溶劑的,所以盡量運用玻璃pH計來丈量活動相的pH。
c) 濾膜。
劣質(zhì)的或者型號錯誤的濾膜常常是鬼峰呈現(xiàn)的緣由。
d) 放置時間過長。
活動相在空氣中暴露時間過長,就可能吸收空氣中的有機雜質(zhì),有時活動相中的添加劑,例如TFA,時間長了會氧化從而產(chǎn)生雜質(zhì)。
2、儀器樣品稀釋液與活動相極性或者pH相差太大。
這也是招致鬼峰的緣由之一,這種問題很有可能招致樣品分為兩個不同的階段出峰,從而產(chǎn)生雙峰或者多峰。
根據(jù)分析對象,色譜柱的類型,操作儀器的擋次和具體檢測器,若使用不合要求的低純度氣體,不良影響有以下幾種可能: 1)樣品失真或消失:如H2O氣使氯硅樣品水解; 2)色譜柱失效:H2O,CO2使分子篩柱失去活性,H2O氣使聚脂類固定液分解,O2使PEG斷鏈?! ?)有時某些氣體雜質(zhì)和固定液相互作用而產(chǎn)生假峰; 4)對柱保留特性的影響:如:H2O對聚乙二醇等親水性固定液的保留指數(shù)會有所增加,載氣中氧含量過高時,無論是極性或是非極性固定液柱的保留特性,都會產(chǎn)生變化,使用時間越長影響越大。 5)檢測器: TCD:信噪比減小,無法調(diào)零,線性變窄,文獻中的校正因子不能使用,氧含量過大,使元件在高溫時加速老化,減少壽命?! ID:特別是在Dt≤1Ⅹ10ˉ⒒/秒下操做時,CH4等有機雜質(zhì),會使基流激增,噪聲加大不能進行微量分析?! CD:載氣中的氧和水對檢測器的正常工作影響最大,在不同的供電工作方式中,脈沖供電比直流電壓供電影響大,固定基流脈沖調(diào)制式供電比脈沖供電影響大。這就是為什么目前諸多在操作固定基流脈沖調(diào)制式ECD時,在載氣純度低時必須把載氣純度選擇開關從“標準氮”撥到“一般氮”位置的原因。大家會發(fā)現(xiàn)在此情況下操作,不但靈敏度變低,而且線性亦變窄了。實踐證明:在操作ECD時,載氣中的水含量低于0.02ppm,氧低于1ppm時可達到較理想的性能。值得指出的是,我們多次發(fā)現(xiàn)由于儀器的調(diào)節(jié)氣路系統(tǒng)被污染而造成的對載氣的二次污染至使ECD基頻大幅度增加使信燥比減小?! PD和NPD等常用檢測器,由于他們屬于選擇性檢測器,操做時要根據(jù)分析要求,特別注意被測敏感物質(zhì)中雜質(zhì)的去除。 6)在做程序升溫操作時,載氣中的某些雜質(zhì),在低溫時保留在色譜柱中,當拄溫升高時不但引起基線漂移還可能在譜圖上出現(xiàn)比較寬的"假峰"?! ?)儀器影響 a.各類過濾器加速失效; b.調(diào)節(jié)閥(穩(wěn)壓閥,穩(wěn)流閥,針形閥)被污染,氣阻堵塞,調(diào)節(jié)精度降低或失靈; c.氣路系統(tǒng)被污染,若要恢復儀器在高靈敏度情況下操做,有時要吹洗很長時間(可能一周以上)污染嚴重時有時再也無法恢復?! .檢測器的壽命,實踐表明,對ECD和TCD的壽命影響最明顯,應引起用戶特別注意
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