液相色譜儀常見故障處理
1、氣泡溢出
流動相內(nèi)有氣泡,關閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0～3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。
2、柱壓高原因
(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi);
(2)樣品污染沉積。處理對于第一種情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
3、既無壓力指示,又無液體流過
(1)泵密封墊圈磨損;
(2)大量氣泡進入泵體。處理對于第一種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
4、壓力波動大,流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
5、出峰不佳,峰分叉
(1)色譜柱被污染;
(2)柱頭填料塌陷。處理對于第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。
6、峰面積重復性不佳
(1)進樣閥漏液;
(2)加樣針不到位。
(3)液量不足.
處理對于第一種情況更換進樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應清洗儲液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
泵是安捷倫液相色譜儀的核心，泵將流動相從溶劑瓶輸送到液相流路系統(tǒng)中，并要在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。泵的狀態(tài)正常是液相色譜準確分析的基礎，所以平日一定要重視對泵的維護。下面就安捷倫液相色譜儀1220泵的日常維護進行簡要的介紹。
安捷倫液相色譜儀1220
1.安捷倫液相色譜儀-流動相的準備
為了防止顆粒性物質(zhì)對泵組件的磨損，流動相（特別是水相）應該新鮮配置并且過濾。上機前對流動相進行適當?shù)某暶摎?，以保證更好的在線脫氣和在線混合的效果。
2.安捷倫液相色譜儀-比例閥溶劑通道的分配
四元泵的比例閥有A、B、C、D四個通道，建議將鹽溶液接在下面的通道（A或D），將有機溶劑接在上面的通道（B 或C）上,也就是有機通道在鹽溶液通道的上面。且建議用水定期沖洗所有比例閥通道除去可能在閥口析出的鹽結晶。
3.安捷倫液相色譜儀-過濾白頭的維護
過 濾白頭位于排氣閥內(nèi)，是一種聚四氟乙烯材質(zhì)的微孔過濾芯，用于過濾流動相中的微粒，是經(jīng)常需要維護的地方。當系統(tǒng)壓力有異常增高時，首先需要檢查過濾白頭 是否阻塞了。判斷的方法是：打開排氣閥，以純水作流動相，將流速設為5mL/min，如果泵壓超過10bar，則說明過濾白頭需要更換了。對過濾白頭的預 防性維護通?？梢允?/span>1~2個月更換1次，更換時同時檢查一下過濾白頭前面的密封金墊，如果發(fā)現(xiàn)變形，也應及時更換。 如果過濾白頭更換過于頻繁，則需要認真檢查一下流動相的品質(zhì)，確保流動相上機前過濾，確保使用了合適的過濾膜。如果流動相有長菌現(xiàn)象，除了配置新的溶劑，還應對相應的溶劑管線和脫氣機通道進 行徹底的清洗。
4.安捷倫液相色譜儀-柱塞桿與柱塞密封圈的維護
柱塞密封圈套在柱塞桿上用于隔離泵與外界，工作時，它和柱塞桿進行頻 繁的往復摩擦，使用一段時間后，會有一定的磨損，因而密封圈需要定期更換以保證系統(tǒng)的密封性。更換活塞密封墊時檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導 致輕度滲漏，并降低密封墊的使用壽命。應盡早更換有劃痕的活塞。
柱塞密封圈有反相和正相之分，反相密封圈為黑色，石墨Teflon材質(zhì)；正相呈橘黃色，聚乙烯材質(zhì)，更適用于正相溶劑。1100/1200標配的是反相密封圈，正相應用時，需要更換為正相密封圈。
鹽 溶液對柱塞密封圈的壽命有著很大的影響，使用有鹽溶液作為流動相的體系時，要注意鹽溶液通道的清洗，千萬不能讓鹽溶液在系統(tǒng)中過夜，常常一個晚上析出的鹽 粒就會造成系統(tǒng)堵塞，對泵產(chǎn)生較大的損害。為了延長密封圈和柱塞桿的壽命，在經(jīng)常使用較高濃度的緩沖鹽溶液的情況下，建議安裝柱塞清洗附件。柱塞清洗的原 理在于：柱塞泵在工作時，雖然有密封圈密封，但由于毛細作用，還是會有一些流動相滲入到密封圈與柱塞桿之間。如果流動相中有緩沖鹽，當柱塞桿壁上的溶劑揮 發(fā)掉后，極細小的鹽粒留了下來。這樣的鹽粒就象砂紙一樣磨損著柱塞桿和柱塞密封圈，會大大降低柱塞桿和密封圈的壽命。柱塞清洗附件是在柱塞桿的中間加入了 一個可以有水流過的腔體，通過水不斷的流動，就可以帶走滲進來的鹽溶液，防止了鹽粒的析出，保護了柱塞桿和柱塞密封圈。通常我們往柱塞清洗的水里加入 10％的異丙醇，可以減小水的張力，便于清洗液流動，并且抑制長菌。但有一點要注意的是，裝有柱塞清洗附件的泵頭，清洗液流量可以很?。ㄈ鐩]分鐘幾滴）， 但一定不要讓清洗通道里干涸，如果水流光了，應該盡快換上新的溶液。否則會減少柱塞桿和密封圈的壽命。
5.安捷倫液相色譜儀-主動閥的維護
主 動閥是流動相進入泵體的門戶。如果我們發(fā)現(xiàn)流量為零，流量不穩(wěn)，或泵壓波動特別大，常常都是因為主動閥漏或是堵了。主動閥里面裝有一個小的單向閥芯，我們 將其取下，在異丙醇內(nèi)超聲清洗一下，一般能解決這樣的問題。如果超聲不能解決問題的話，可以更換該閥芯。對于經(jīng)常使用緩沖鹽體系的用戶，手頭常備一個這樣 的閥芯是非常有用的，往往可以及時解決問題，大大的降低停機帶來的損失。
6.安捷倫液相色譜儀出口閥的維護
出口閥內(nèi)部也有，如果有鹽?；蚱渌s質(zhì)滲入其中，也會造成出口閥的堵或漏，常常表現(xiàn)為壓力的異常波動。通常我們可以用異丙醇或60度左右的熱水沖洗系統(tǒng)，如果無效，在異丙醇中超聲清洗它常常會解決這樣的問題。
①樣品在流動相中可以是可溶的，如果可能的話，應當用流動相溶解樣品，它可使色譜圖中低k’段的虛假峰盡可能減少。
?②選擇合適的進樣閥或注射器。一般說來只要選擇適當，都能獲得很好的重復性。在選擇進樣閥時，要考慮它應有較好的清洗條件，并能減少而不是加劇近樣過程中通過柱和檢測器的紊亂狀態(tài)。無論使用進樣閻還是注射器，部應當盡可能地減小結構和死體積。
?③為了位監(jiān)控嚴密，應當盡可能地選用一種內(nèi)標，尤其是在遇到復雜樣品時，更應如此。
④如果是單獨購買一種進樣系統(tǒng)，則一定要保證聯(lián)接用的固定裝置和柱子上的固定裝置相配。
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